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中藥由黃芪、丹參等4味中藥制成，是用于治療慢性腎衰的一種新藥，給藥方式為靜脈滴注，制劑穩(wěn)定，無(wú)毒副作用，療效顯著安全。有文獻(xiàn)報(bào)道用TLC法［1，2］或HPLC［3～5］法測(cè)定丹參中原兒茶醛含量。本文采用TLC法作為樣品前處理的純化手段，以HPLC法測(cè)定丹參制劑中原兒茶醛含量，本法準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好。

1、藥品與試劑

原兒茶醛對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；由成都市中醫(yī)藥研究所制劑研究室研制，批號(hào)：910314 、920815、931014，規(guī)格：每瓶100 mL；實(shí)驗(yàn)用水為雙重蒸餾水；其余試劑均為分析純。

2、儀器與色譜條件

P230液相色譜儀，紫外檢測(cè)器，。分析柱：Shimpack ODS柱 ( 5 μm, 6 mm×150 mm )；預(yù)柱：YWG－C18柱(7 μm , 4.6 mm×150 mm )；流動(dòng)相：甲醇－水－冰醋酸 (24∶75∶1)；流速：1.0 mL.min-1；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：328 nm。

3、直線回歸方程的測(cè)定

取原兒茶醛對(duì)照品，加甲醇溶解并稀釋成1 mg*mL-1的對(duì)照品貯備液，放冰箱4 ℃保存?zhèn)溆?；精密量取該貯備液適量，用甲醇配成含原兒茶醛分別為20、40、60、70、80及120 μg.mL-1的對(duì)照品溶液，各進(jìn)樣10 μL,按色譜條件測(cè)定。以原兒茶醛基線構(gòu)成之面積稱峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面積( Y )對(duì)對(duì)照品溶液濃度( X )回歸得直線方程：

Y=177029 70651X　r=0.9996

結(jié)果表明：原兒茶醛檢測(cè)限為0.9 μg.mL-1 (S/N = 3∶1)，線性范圍為20～120 μg.mL-1 。

4、測(cè)定方法

4.1、供試品溶液的制備　精密量取樣品20 mL，置于用水濕潤(rùn)過(guò)的60 mL分液漏斗中，加飽和氯化鈉溶液5 mL，用提取3次，每次20 mL，振搖1 min，合并提取液，水浴(60～65 ℃)蒸干，用無(wú)水乙醇溶解殘?jiān)?，定量轉(zhuǎn)移至1 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，作為薄層色譜分離的供試品溶液。

4.2、TLC分離和HPLC測(cè)定　精密量取上述供試品溶液200 μL，點(diǎn)于含0.5 % CMC硅膠G薄層板上(10 cm×20 cm，層厚0.5 mm，105 ℃活化30 min，點(diǎn)成5 cm條狀)，另點(diǎn)1 mg.mL-1原兒茶醛對(duì)照品無(wú)水乙醇溶液2 μL于另一側(cè)作對(duì)照，用展開(kāi)劑氯仿－苯－乙酸乙酯－甲酸(15∶10∶8∶1.8)展開(kāi)，取出揮干溶劑，晾干30 min，于360 nm紫外光燈下(見(jiàn)圖1)，以原兒茶醛對(duì)照品前后亮黃色熒光條斑為界劃痕，刮取劃痕內(nèi)硅膠粉，置具塞離心管中，加入無(wú)水乙醇10 mL，用力振搖1 min，離心(3000 r.min-1，5 min)，傾出上清液。如此反復(fù)洗脫3次，合并洗脫液，蒸干，殘?jiān)眠m量甲醇分?jǐn)?shù)次溶解并轉(zhuǎn)至1 mL容量瓶中，揮去溶劑，精密加甲醇1 mL，振蕩使溶解，吸取10 μL進(jìn)行測(cè)定(見(jiàn)圖2－A)，用二點(diǎn)內(nèi)插法計(jì)算原兒茶醛含量，即得。

4.3、空白檢查　取不含丹參的空白樣品(940624)20 mL，按項(xiàng)“4.1”、“4.2”操作，吸取10μL注入液相色譜儀(見(jiàn)圖2－B)，可見(jiàn)空白樣品在原兒茶醛出峰處無(wú)干擾峰。

5 、加樣回收率測(cè)定

準(zhǔn)確量取已測(cè)知含量的樣品，定量加入不同濃度水平原兒茶醛對(duì)照品溶液，按上述測(cè)定方法測(cè)定

6、重復(fù)性測(cè)定

取40 μg.mL-1對(duì)照品溶液10 μL進(jìn)樣，連續(xù)6次，測(cè)得峰面積的RSD 為 0.11 %。

7、樣品測(cè)定

取樣品20 mL，按項(xiàng)“4.1”、“4.2” 方法處理，進(jìn)樣10 μL，測(cè)定910314、920815、931014批號(hào)樣品含量分別為3.191、3.063、3.108 μg.mL-1 (n=3)，RSD分別為0.22 %、0.31 %、0.19 %。

8、討論

8.1、采用不同溶劑提取樣品后直接溶解進(jìn)樣，分離效果不理想，圖譜雜亂。用柱層析和薄層法進(jìn)行預(yù)處理結(jié)果比較，以薄層法簡(jiǎn)單易行，甩掉部分雜質(zhì)干擾，HPLC圖譜清晰。

8.2、在360 nm紫外線下，原兒茶醛斑無(wú)熒光，故以原兒茶醛對(duì)照品斑前后亮黃色熒光條斑為界刮下洗脫，保證樣品中原兒茶醛全部被刮下。

8.3、在樣品預(yù)處理時(shí)曾采用氯仿、甲酸乙酯、苯及進(jìn)行萃取，結(jié)果以提取為佳，3次提取回收率為99 %。加入飽和氯化鈉以防止提取時(shí)乳化物產(chǎn)生。