◎ 多肽的保存 多肽在-20℃很穩(wěn)定,特別是冷凍干燥并保存在干燥器中,在將它們暴露于空氣之前, 冷凍干燥多肽可以放于室溫。這將是濕度影響減少,當(dāng)無法冷凍干燥時(shí),*好的方法是以小的工作樣量存放。 對(duì)于含Cys, Met orTrP的多肽,脫氧緩沖劑對(duì)其溶解,因?yàn)檫@種多肽可易空氣氧化, 在封瓶前,慢慢流過多肽的氮?dú)饣驓鍤庖矔?huì)降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,所有這些肽與不含這些有問題解苷的那些肽相比,生命期有限。◎ 多肽的溶解性 大多數(shù)肽的優(yōu)選溶劑是超純抽氣水。稀乙酸或氨水分別對(duì)于堿性或酸性多肽的溶解很重要。這些方法不溶的多肽, 需要DMF、脲、guanidiniam chloride或acetonitnle來溶解,這些溶劑可能某些實(shí)驗(yàn)有副作用。所以我們建議設(shè)計(jì)多肽時(shí)要加注意?! 埢鵄la, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val將全增加多肽的溶解難度。 您需要特殊的多肽或任何技術(shù)幫助,請(qǐng)隨時(shí)與我們聯(lián)系。 我們包你滿意,對(duì)于我們不能適當(dāng)合成的順序,我們不收費(fèi)。◎ 多肽的保存和操作 包裝 1mg或更少的多肽按凈重包裝,聲明的小瓶重不含相關(guān)抗離子和水。 例如,氨基酸分析決定的肽含量是80%, 在1mg樣品中,那么瓶中毛重是1.25mg。 大量的多肽以毛重算。標(biāo)出的重量含相關(guān)抗離子和水, 例如,25mg樣品中肽百分比為90%,那么,實(shí)際肽量為25mg×90%=22.5mg 不要把肽含量和純度搞混了。肽的純度可能是99%, 而肽含量相關(guān)帶電基團(tuán)(如Arg, Lys )的抗離子量和肽親水性決定。這是合成肽的本身特性?!颉龈呻牡谋4妗 ∷挟a(chǎn)品應(yīng)存于冰箱, *好為-20℃。多數(shù)肽以此方法可以存放幾年不變?!颉‰娜芤旱谋4妗 ∪芤弘倪h(yuǎn)比凍干形式不穩(wěn)定,溶液應(yīng)為中性pH(pH5-7), -20℃保存的,為避免樣品的反復(fù)凍融, *好分成小樣存放。一份樣品融凍后未用完, 應(yīng)扔掉,**降解有時(shí)會(huì)成為溶液肽的麻煩, 為克服此,肽應(yīng)溶于無菌水, 或肽溶液用0.2μ M濾膜過濾?!颉《嚯牡闹亟ê筒僮鳌 《鄶?shù)肽溶于無菌蒸溜水。初次溶解時(shí),要注意使初始濃度比要求濃度大,如果多肽僅有限溶解性, 這便允許加入其它溶解劑或緩沖鹽?! ∪绻嚯脑谒械娜芙庑杂邢?,有幾種選擇可幫助溶解: 對(duì)堿性肽用稀乙酸(含Arg , Lys , His) 酸性肽用稀氨水(含Asp, Glu) 對(duì)極疏水的肽用10%有機(jī)修飾物(Acetonitnile , Methanol) 極不溶的肽用DM50或DMF guanicline hydrochloride或脲的濃溶液也很有用, 與上述方法合用, 聲處理也是溶解多肽的有效手段?!颉《嚯膽?yīng)用和保存 多肽具廣泛的溶解性。多肽不溶的主要問題是形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。除了*太肽外,這點(diǎn)都會(huì)發(fā)生, 在有多重疏水殘基的肽中更顯著。鹽會(huì)促進(jìn)二級(jí)結(jié)構(gòu)形成。我們建議先在無菌蒸餾水或去離子中溶解多肽。如需要增加溶解率, 可用聲處理。溶解仍有問題, 加少量稀乙酸(10%)或氨水,會(huì)便于溶解。 要長期保存多肽, *好冷凍干燥,冷干粉可在-20℃或更低存放幾年而很少或無降解。溶液中的多肽遠(yuǎn)不穩(wěn)定。 多肽易受**降解,應(yīng)用無菌純化水溶解?! 『蠱et, Cgs或Try殘基的多肽溶液由于氧化,壽命有限。應(yīng)溶于無氧溶劑, 為防止重復(fù)凍融的破壞, 建議溶解過量的肽的便實(shí)驗(yàn),其余多肽以固體形成保存?!颉PLC分析和純化 分析HPLC使用柱子和泵系統(tǒng),可以經(jīng)受傳遞高壓,這樣可以用極細(xì)的微粒(3-10μ m)做填料。由此多肽要在幾分鐘內(nèi)高度被分析?! PLC分兩類:離子交換和反相。 離子交換HPLC依靠多肽和固相間的直接電荷相互作用。柱子在一定PH范圍帶有特定電荷衍變成一種離子體,而多肽或多肽混合物,由其氨基酸組成表現(xiàn)出相反電荷。 分離是一種電荷相互作用,通過可變PH, 離子強(qiáng)度, 或兩者洗脫出多肽,通常, 先用低離子強(qiáng)度的溶液,以后逐漸加強(qiáng)或一步一步加強(qiáng),直到多肽火柱中洗脫出。離子交換分離的一個(gè)例子使用強(qiáng)陽離子交換柱。如sulfoethylaspartimide通過酸性PH中帶正電來分離?! 》聪郒PLC條件與正常層析正相反。多肽通過疏水作用連到柱上,用降低離子強(qiáng)度洗脫, 如增加洗脫劑的疏水性。通常柱子由共價(jià)吸附到硅上的碳?xì)渫殒湗?gòu)成,這種鏈長度為G4-G8碳原子。 由于洗脫是一種疏水作用。長鏈柱比短鏈對(duì)小的, 高帶電肽好。另一方面大的疏水肽用短鏈柱洗脫好。 然而,總體實(shí)踐中, 這兩類柱互變無多少顯著差別,別類載體由碳水化合物構(gòu)成, 比如苯基?! 〉湫偷牟僮鞒S蓛删R沖劑組成,0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用線型梯變以每分鐘0.5%到1.0%改變的速度混合。常見分析和純化用柱為4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用徑向填柱,那么大小是8×100(3-10μ m)和25×250mm(10μ m) 大量各種緩沖劑含許多不同試劑,比如heptafluorobutyric酸,0.1%磷酸, 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸鈉/氨,TFA/TEA,磷酸鈉或鉀,異戊酚。這樣許多不同組合可形成緩沖劑,但要注意一點(diǎn):硅反相柱料不能長時(shí)間暴露于高pH,甚至微堿pH, 因?yàn)檫@樣會(huì)破壞柱子。
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