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曝光和色彩平衡錯(cuò)誤是可能發(fā)生的彩色顯微攝影和顯微鏡，業(yè)余和專(zhuān)業(yè)都已經(jīng)遇到的*常見(jiàn)的問(wèn)題。 一般，源的錯(cuò)誤是顯而易見(jiàn)的，或可以容易地確定通過(guò)折回的步驟導(dǎo)致的顯微照片曝光。

其他類(lèi)似的錯(cuò)誤，如倒易律失效，冷凝器畸變，和意想不到的顏色變化不太明顯，往往采取一些廣泛的故障排除，以揭開(kāi)源。 缺乏適當(dāng)?shù)纳珳刂g的平衡顯微鏡光源和膜乳液是意想不到的顏色變化在顯微攝影中的*常見(jiàn)的原因之一。 如果光源的色溫太低，膜，顯微照片將有一個(gè)整體的淡黃色或偏紅，會(huì)出現(xiàn)熱 。 另一方面，當(dāng)光源的色溫過(guò)高的膜，顯微照片將有偏藍(lán)，會(huì)出現(xiàn)涼爽 。 錯(cuò)配的程度，將決定這些顏色的變化程度，具有很大的差異，導(dǎo)端的顏色變化。

圖1給出了一個(gè)乘法染色薄款的苜蓿植物組織，已經(jīng)感染了冠疣菌，Physoderma alfalfae，顯示幾種常見(jiàn)的曝光和色彩平衡錯(cuò)誤的顯微照片。 曝光不足和曝光過(guò)度，兩個(gè)錯(cuò)誤屢有發(fā)生，左手部分深色和淺色領(lǐng)域中的顯微照片圖1所示。 右側(cè)部分的顯微照片，顯示一個(gè)共同的顏色轉(zhuǎn)變的原因有多種，可以發(fā)生。 表示的帶藍(lán)色和黃色區(qū)域的薄膜，這是由于色溫不當(dāng)?shù)氖褂盟a(chǎn)生的任一鎢膜與鎢光源的的日光光源或日光膠片的色彩平衡錯(cuò)誤。 這些以及其他類(lèi)似的錯(cuò)誤，如使用太沉重染色或太厚的標(biāo)本，代表*常見(jiàn)的錯(cuò)誤，所面臨的一個(gè)在常規(guī)的顯微鏡顯微照相。 以下各段處理特定錯(cuò)誤和故障的曝光和色彩平衡的顯微照片和現(xiàn)在建議的補(bǔ)救措施。

色彩平衡錯(cuò)誤 -測(cè)試適當(dāng)?shù)钠胶怙@微鏡照明，電影的乳液設(shè)計(jì)相匹配，是有明確的背景下的顯微照片出現(xiàn)白色。 一個(gè)藍(lán)色的背景表示色溫過(guò)高，而黃色的背景標(biāo)志著色溫太低。 這個(gè)概念被討論的色溫部分的奧林巴斯顯微鏡資源中心顯微鏡底漆 。

使用薄膜還沒(méi)有被正確平衡光源的色溫在顯微攝影，可導(dǎo)致不尋常的色彩變化，造成不自然的色調(diào)，沒(méi)有忠實(shí)地再現(xiàn)，在顯微鏡目鏡看到的顏色。 圖2中的顯微照片表明膠片乳劑和顯微鏡照明光源的色彩平衡之間的過(guò)濾器的正確使用方法。 的中心（圖2（b））是感染蘋(píng)果黑星病， 蘋(píng)果黑星病菌*引起的一個(gè)破壞性的疾病的蘋(píng)果樹(shù)蘋(píng)果樹(shù)干薄款的顯微照片。

標(biāo)本染色植物組織設(shè)計(jì)的四倍混合物并拍下使用3200 K鎢鹵光源64T FUJICHROME，鎢均衡的透明度（轉(zhuǎn)回或幻燈片）膜。 在左側(cè)（圖2（a））是相同的視場(chǎng)拍攝使用FUJICHROME Velvia的，日光平衡的膜，但具有相同的3200 K的鎢鹵燈。 需要注意的是所有色相轉(zhuǎn)移到較長(zhǎng)的波長(zhǎng)和整體形象有一定的偏黃。 在右側(cè)的顯微照片（圖2（c）），用相同的顯微鏡，但使用日光平衡的閃光管為光源，F(xiàn)UJICHROME 64T透明膜的。 在這些條件下，圖像有一個(gè)整體的藍(lán)色的演員，顯得很“酷”。 適當(dāng)?shù)谋∧みx擇圖2（a）會(huì)是FUJICHROME 64T（鎢均衡）和圖2（c），這將是Velvia的FUJICHROME（日光平衡）。

大多數(shù)顯微鏡都配備了產(chǎn)率，色溫度為3200K（匹配室內(nèi)B型膜的色彩平衡），但不適合日光平衡膜的高色溫下，可以設(shè)置為鎢鹵燈。 為了生產(chǎn)光模擬日光品質(zhì)， 過(guò)濾器必須被放置在光路中的顏色轉(zhuǎn)換 。 *常見(jiàn)的轉(zhuǎn)換過(guò)濾器（生產(chǎn)大增量色溫），是柯達(dá)，奧林巴斯顯微鏡，光轉(zhuǎn)換從3200 K至5500 K。80A濾波器，相當(dāng)于日光平衡濾波器被稱(chēng)為的LBD過(guò)濾，尼康顯微鏡過(guò)濾器被稱(chēng)為的NCB過(guò)濾。 請(qǐng)務(wù)必使用一個(gè)過(guò)濾器進(jìn)行顯微攝影時(shí)平衡日光下鎢的電影（3200 K）照明。 其它過(guò)濾器可用于降低色溫或小的增量變化，在我們的討論中審查的影響顯微攝影色溫 。

小于調(diào)整色溫是由“微調(diào)”的過(guò)濾器，通常被稱(chēng)為顏色補(bǔ)償或色彩平衡濾波器的，產(chǎn)生的增量變化為100 K 600 K的色溫。 各種過(guò)濾器是市售協(xié)助photomicrographer的光學(xué)和照明問(wèn)題，以獲得*高質(zhì)量的圖像補(bǔ)償。許多顯微攝影的顏色變化或管進(jìn)入光通路插入適當(dāng)?shù)?strong>柯達(dá)雷登的色彩補(bǔ)償濾鏡是可以的。 顯微攝影中常用的其它過(guò)濾器，如中性密度，對(duì)比度增強(qiáng)，紫外線吸收，熱吸收，紅外，和過(guò)濾器的設(shè)計(jì)，以協(xié)助加強(qiáng)信息揭示的生物污漬。 這些過(guò)濾器可能需要補(bǔ)償，以避免生產(chǎn)彩色顯微照片中的顏色變化。

臨界顯微攝影決定了顏色補(bǔ)償濾波器的顏色變化，這可能會(huì)發(fā)生變化的6原色：紅，綠，藍(lán)色，青色，品紅色，和黃色的中任一項(xiàng)的用于小心控制。 大多數(shù)情況下，電影批次的變化是*個(gè)明顯的新的顯微觀測(cè)時(shí)的背景顏色。 這種顏色應(yīng)該是一個(gè)中性的白色，和顏色的變化發(fā)生時(shí)，他們通常是非常明顯的。 這是一個(gè)簡(jiǎn)單的事情，與顏色補(bǔ)償過(guò)濾器，通過(guò)使用一個(gè)過(guò)濾器的互補(bǔ)色移的背景本校正色彩偏移。 當(dāng)進(jìn)行顯微攝影沉重的負(fù)荷，使用彩色膠片，這是明智的購(gòu)買(mǎi)薄膜具有相同的乳液每卷數(shù)量和儲(chǔ)存在冰箱或冰柜中多余的。 然后，可以使用一個(gè)測(cè)試輥，以確定的彩色平衡變量，應(yīng)保持不變的其余部分的膜批次。 推薦的程序是沒(méi)有補(bǔ)償濾波器，其次通過(guò)每個(gè)的柯達(dá)雷登CC10系列過(guò)濾器（CC10R（紅色），CC10G（綠色），CC10B（藍(lán)色），CC10C（青色），CC10M的幀暴露暴露一個(gè)單一的框架（品紅色），和CC10Y（黃色））。 對(duì)齊后在5000 K光表所有七個(gè)顯微照片顯示了干凈的白色或非常淺的灰色背景，背景是一個(gè)已經(jīng)被正確過(guò)濾。 這個(gè)概念更詳細(xì)的討論，在我們的部分過(guò)濾器的彩色顯微攝影 。

在圖3所示的顯微照片顯示色彩校正使用彩色薄款李子樹(shù)莖組織感染黑色結(jié)，，由*Apiosporina morbosa（也稱(chēng)為為Dibotryon morbosum）引起的一種破壞性疾病的梅樹(shù)的轉(zhuǎn)移。 圖3（b）所示的圖像時(shí)，適當(dāng)?shù)匦Ｕ纳蜉啺唷?/span> 在左邊的顯微照片（圖3（a））受到一個(gè)藍(lán)色的演員，這可能是由于輕微的色差溫度的不平衡。 進(jìn)入顯微鏡的光路中插入一個(gè)柯達(dá)：雷登CC20Y（黃色）濾波器，在圖3（a）所示的顏色從轉(zhuǎn)移類(lèi)似于在圖3（b）的顯微照片。 同樣的顯微照片，圖3（c）中，有一個(gè)明確的，一個(gè)CC10M CC10B補(bǔ)償濾波器組的結(jié)合使用可以得到糾正，帶綠色偏色。

在許多情況下，低密度的顏色補(bǔ)償過(guò)濾器可以有效地使用各種染料被污染的組織*薄切片，以提高顏色再現(xiàn)性。 每個(gè)試樣必須嘗試和錯(cuò)誤的基礎(chǔ)上評(píng)估的，因?yàn)檫^(guò)度使用顏色補(bǔ)償濾波器可導(dǎo)致降解互補(bǔ)的污垢的顏色，可能會(huì)呈現(xiàn)一種色調(diào)的背景與。 它通常是可取的，限制試圖使用它們，以提高染色的顏色時(shí)，色彩補(bǔ)償濾鏡密度低于CC20。

生物組織的薄切片也常常與一種或多種有機(jī)染料染色，有選擇性地增強(qiáng)存在于試樣中的各種功能的可見(jiàn)性。很好的強(qiáng)度和色調(diào)所產(chǎn)生的大多數(shù)生物組織污漬將重現(xiàn)彩色膠片上，但往往會(huì)出現(xiàn)一些污漬沖了出來(lái)，或有他們的顏色，尤其是在多個(gè)染色混合物轉(zhuǎn)移。 在許多情況下，顏色補(bǔ)償過(guò)濾器可以幫助恢復(fù)大部分或全部失去的顏色，但太多的過(guò)濾可以影響鄰近的染色特性的顏色和背景。 這個(gè)問(wèn)題發(fā)生與流行的污漬曙紅，品紅和亞甲基藍(lán)，這是不是很好的再現(xiàn)大多數(shù)彩色膠片。 通常情況下，這些染料染色的組織，無(wú)論是單獨(dú)使用或在混合物中，出現(xiàn)渾濁和色彩飽和度的缺乏。

為了抵消這種效果，顯微鏡使用一個(gè)的鐠釹過(guò)濾器 ，其中包含稀土元素溶解在玻璃的組合。 釹鐠混合物過(guò)濾器除去部分的橙色，棕色，藍(lán)色和紅色染色的功能，在試樣的色彩飽和度強(qiáng)度增加的效果，即在可見(jiàn)光光譜區(qū)域。 消光系數(shù)*高的是580和590納米之間的鐠釹過(guò)濾器，使過(guò)濾器除去大部分的橙色和黃色的顏色，往往暗紅色和藍(lán)******調(diào)的彩色薄切片。

圖4（b）給出人結(jié)腸上皮組織染色，曙紅和蘇木精的混合物，和用釹鐠插入顯微鏡光路中的過(guò)濾器拍攝的圖像。 注意在此顯微紅色和藍(lán)色的色調(diào)相比，對(duì)于同一試樣沒(méi)有鐠釹過(guò)濾器（圖4（a）），其中有一個(gè)整體偏黃的色彩飽和度的急劇增加。 嘗試使用色彩補(bǔ)償濾鏡校正圖像一個(gè)：CC10B（藍(lán)色）和CC10M（洋紅色）相結(jié)合的色彩補(bǔ)償濾鏡是用來(lái)去除多（但不是全部）的黃******調(diào)，在圖4（c）所示試樣。 雖然色彩校正顯微照片如圖4（C）接近的質(zhì)量，生產(chǎn)鐠釹過(guò)濾器（圖4（b）條），它仍然有輕微的偏黃，缺乏專(zhuān)門(mén)的過(guò)濾器與豐富的色彩質(zhì)量。

在某些情況下，可以成為背景的生物試樣淺色染色過(guò)程期間，不希望的偽影。 為了避免這種情況，顏色補(bǔ)償過(guò)濾器可以用于以減去背景顏色，只要它是不是過(guò)于飽和。 薄切片染色的另一個(gè)問(wèn)題是著色的安裝介質(zhì)。 制備薄切片，加拿大香脂，大眾媒體通常會(huì)轉(zhuǎn)淺黃色，隨著年齡的增長(zhǎng)，或整裝標(biāo)本。 一個(gè)藍(lán)色的色彩補(bǔ)償濾鏡（CC10-20B）通常會(huì)克服這個(gè)問(wèn)題，樣本，除非是一本很厚的整體安裝。 在這種情況下，它可能是不可能中和黃色的色調(diào)。

顯微鏡鎢燈不發(fā)出顯著的紫外線的光量，但一些新的鹵鎢燈，除了汞和氙氣燈，產(chǎn)生相當(dāng)量在300-400納米范圍內(nèi)的紫外線。 紫外線照射，可暴露在許多彩色膠片的感藍(lán)乳劑層，導(dǎo)致整體的顯微照片，有一個(gè)藍(lán)色的演員。 這主要是熒光顯微鏡的問(wèn)題，但它可以發(fā)生在任何顯微鏡使用高強(qiáng)度的鎢 - 鹵素，汞，或氙氣燈。 為減少紫外線光，使用柯達(dá)雷登的2B或2E吸收紫外線輻射的過(guò)濾器，在390和415納米以下，分別為。 2B濾波器去除基本上所有的紫外線的波長(zhǎng)，只留下可見(jiàn)光照亮標(biāo)本。 2E過(guò)濾器有更廣泛的波長(zhǎng)阻塞，也將刪除一些紫色和藍(lán)色光波長(zhǎng)較短，使得該過(guò)濾器不太理想的彩色顯微攝影。

圖5中所示的紫外線光的影響，彩色顯微攝影。 在照片的左（圖5（a））示出了伊紅 - 蘇木精染色薄膜部的神經(jīng)細(xì)胞中的人髓質(zhì)。 有一個(gè)整體偏藍(lán)洋紅色的顯微照片，彌漫著*標(biāo)本的特點(diǎn)和背景。 將柯達(dá)雷登2B濾波器和CC10G的補(bǔ)償過(guò)濾器組合成顯微鏡光路后，的圖像（圖5（b））。 請(qǐng)注意，這個(gè)顯微演示更好的色彩飽和度和更清潔的背景消除偏藍(lán)。 試圖糾正單獨(dú)色彩的色調(diào)誤差與CC20Y（黃色）顏色補(bǔ)償濾波器，在圖5（c）所示。 注意背景仍然有一個(gè)由過(guò)濾器不能除去的反感偏藍(lán)。

近90％的鎢或鎢 - 鹵燈所發(fā)出的輻射發(fā)生的形式，產(chǎn)生熱量，這是與紅外波長(zhǎng)。 吸熱過(guò)濾器，以補(bǔ)償該工件，可以添加到顯微鏡的光路中，靠近所述照射器，以除去不需要的紅外線的波長(zhǎng)和保護(hù)顯微鏡的光學(xué)元件，過(guò)濾器，和試樣不受熱損傷。 某些吸熱的過(guò)濾器是由一種特殊類(lèi)型的派熱克斯耐熱玻璃稱(chēng)為為Aklo，該吸收紅外線的熱射線，綠色或藍(lán)綠色的顏色。 與Aklo的過(guò)濾器可能會(huì)引入到顯微照片的色彩平衡偏差。 可以得到糾正這種不良的副作用與顏色補(bǔ)償過(guò)濾器的吸熱的過(guò)濾器的顏色是互補(bǔ)的。 如果從燈殼體，熱過(guò)濾器可以去除，這樣做并檢查它在5500■輕型表。 淺綠色熱過(guò)濾器可以補(bǔ)償由CC10M或CC20M的洋紅******彩補(bǔ)償濾鏡，藍(lán)綠色高溫過(guò)濾器，可以補(bǔ)償由淡紅色（CC10R或CC20R）濾波器。 將互補(bǔ)的過(guò)濾器熱過(guò)濾器的頂部，直到其中一個(gè)發(fā)現(xiàn)，正好平衡帶有熱過(guò)濾器上的顏色變?yōu)橹行浴?/span> 當(dāng)插入顯微鏡光路，這種補(bǔ)償濾波器應(yīng)減輕色彩平衡問(wèn)題。 一些較新的顯微鏡放回?zé)粝湓O(shè)計(jì)，以反映熱的分色干擾濾波器。 分色濾光器中，能夠更有效地阻擋熱量比石英或玻璃吸熱過(guò)濾器，而不會(huì)出現(xiàn)裂紋或斷裂時(shí)，顯著量的熱被吸收。 他們也不太容易引起不必要的彩色顯微照片中的顏色變化。

冷凝器色差 -顏色平衡可能會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤使用阿貝消球差臺(tái)下冷凝器，這兩者都缺乏校正色差時(shí)，在顯微攝影。 即使在顯微鏡已正確配置科勒照明和冷凝器和現(xiàn)場(chǎng)光圈隔膜有正確的光圈大小和位置，圖像會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色或紅色的視場(chǎng)光闌葉片邊緣附近的重點(diǎn)。 這的神器是由于色差，會(huì)影響整體的形象和色彩平衡上的顯微照片，有顯著的影響。 稍微向上或向下移動(dòng)顯微鏡焦點(diǎn)將導(dǎo)致附近的視場(chǎng)光闌葉片被翻譯作為冷凝器轉(zhuǎn)移至紅黃色變?yōu)樗{(lán)色的顏色過(guò)渡。 色差色偏文物，可以通過(guò)適當(dāng)?shù)倪^(guò)濾成功刪除，但不可能消除任何機(jī)制改進(jìn)聚光光學(xué)校正像差錯(cuò)誤。 銘記這一點(diǎn)，謹(jǐn)慎行事時(shí)，進(jìn)行阿貝和齊明冷凝器的彩色顯微攝影。

通過(guò)仔細(xì)選擇冷凝器的位置，產(chǎn)生了輕微的紅色邊緣，只是里面的形象視場(chǎng)光闌葉片和相應(yīng)的藍(lán)色外刀片定位密切邊緣像差的影響可以*小化。 雖然這不會(huì)消除神器，這將有助于彌補(bǔ)每種顏色移位，并產(chǎn)生一個(gè)較為中性的色彩平衡的顯微照片，甚至可以進(jìn)一步改善色彩補(bǔ)償濾鏡。 阿貝或齊明冷凝器是一致的定位，重要的是確保這些冷凝器的顯微照片中再現(xiàn)的色彩質(zhì)量。

圖6給出了一系列的彩色葉薄款阿貝聚光疊加在視場(chǎng)光闌的顯微照片。 在左邊的顯微照片（圖圖6（a））示出的位置，以產(chǎn)生一個(gè)紅色的邊緣附近的視場(chǎng)光闌葉片，冷凝器的顯微照片的中心（圖6（b））所示的位置與葉片附近的藍(lán)色的條紋。 在右側(cè)（圖圖6（c）），紅色條紋出現(xiàn)的視場(chǎng)光闌葉片和藍(lán)色的條紋的另一一側(cè)上。 這發(fā)生在冷凝器或燈絲與光軸位置，是一個(gè)很好的測(cè)試顯微鏡對(duì)準(zhǔn)。

具有較高程度的光學(xué)校正（平場(chǎng)消色差和消色差消球差）的冷凝器推薦高品質(zhì)的彩色顯微攝影。 然而，當(dāng)它是需要使用低級(jí)校正冷凝器，小心地保持的的顯微攝影會(huì)話和使用顏色補(bǔ)償過(guò)濾器，以減少造成色差的顏色工件在相同的位置在整個(gè)冷凝器的孔徑光闌的開(kāi)口的大小和高度。

互惠失敗的錯(cuò)誤 -大多數(shù)彩色膠片乳液，旨在短時(shí)間暴露在光線下，通常范圍從1/500秒和1/2秒的間隔時(shí)間。 在光學(xué)顯微鏡中，特別是當(dāng)改變光過(guò)濾器，偏振器，棱鏡，添加在許多的對(duì)比度增強(qiáng)模式（相襯，微分干涉對(duì)比，霍夫曼調(diào)制對(duì)比度等）的光學(xué)路徑中，正確的曝光往往較長(zhǎng)*過(guò)1/2秒。 這部電影的互惠關(guān)系不再成立，而電影需要額外的曝光時(shí)間來(lái)得到正確的曝光。

這種現(xiàn)象被稱(chēng)為互易律失效，它發(fā)生在所有的彩色和黑白照相乳劑的成膜速度快，染料的組合物，或鹵化銀濃度無(wú)關(guān)。 “失敗”只是表明曝光時(shí)間和光強(qiáng)度之間的線性關(guān)系不再成立，并不表示電影乳液在性能方面的失敗。 顯微鏡的照明水平的變化在膜反應(yīng)有時(shí)也被稱(chēng)為長(zhǎng)曝光效果和短曝光效果 。 在低光照條件下（典型的在高放大倍率的熒光顯微鏡和偏光顯微鏡），曝光時(shí)間必須經(jīng)常被擴(kuò)展到顯著的膠片速度損失點(diǎn)。 極短的曝光產(chǎn)生同樣的效果。 大多數(shù)膜也顯示已曝光的鹵化銀晶粒，形成更小的潛像的中心，和一個(gè)較低的發(fā)展速度極其短的曝光時(shí)間在潛像中心的散射增加。

薄膜制造商的數(shù)據(jù)表和特性曲線表明多少需要額外時(shí)間以進(jìn)行適當(dāng)曝光。 每個(gè)單獨(dú)的膜乳液具有調(diào)諧到特定范圍的照度值，其中外面的膜的反應(yīng)遭到破壞，而在倒易律不再持有的響應(yīng)。 互易律失效，通常可以簡(jiǎn)單地通過(guò)黑白膠片的曝光時(shí)間或處理?xiàng)l件的增加補(bǔ)償，但是這并不總是與彩色負(fù)性和透明度薄膜的情況下。 大多數(shù)彩色膠片有三種顏色敏感的染料層，其中每一個(gè)有一個(gè)稍微不同的特性曲線的位置和斜率在不同的反應(yīng)中得到的互易效應(yīng)可能造成不希望的顏色的變化或管型。 通常情況下，暴露時(shí)間和色彩平衡過(guò)濾器使用彩色膠片時(shí)，必須進(jìn)行調(diào)整，以補(bǔ)償很長(zhǎng)或短的風(fēng)險(xiǎn)。

顯微攝影，很長(zhǎng)的曝光時(shí)間，經(jīng)常發(fā)生由于低的照度水平，結(jié)果與對(duì)比度增強(qiáng)技術(shù)如熒光偏振光，如上所述。 實(shí)際上，*過(guò)5分鐘的曝光時(shí)間并不少見(jiàn)，通常導(dǎo)致倒易律失效。 當(dāng)使用黑白膠片，計(jì)算曝光值可以導(dǎo)致缺乏陰影細(xì)節(jié)的底片，但冗長(zhǎng)的曝光補(bǔ)償往往產(chǎn)生太多的高光區(qū)域中的密度，從而增加整體對(duì)比度。 這是由于這樣的事實(shí)，互易律失效的效果大于試樣照明的區(qū)域中是非常低的，可以克服的一個(gè)問(wèn)題，即通過(guò)增加膠片顯影的時(shí)間量。

在圖7中，示出了一系列的連續(xù)曝光4分鐘（圖圖7（a）），0.25秒（圖7（b）），和0.04秒的互易律失效顏色透明度的顯微照片中的效果（圖7（c ））。 該標(biāo)本染色，曙紅，蘇木精和成像FUJICHROME 64T鎢平衡的膜，通過(guò)柯達(dá)E6協(xié)議處理的薄邊的人類(lèi)睪丸肉瘤。 在很長(zhǎng)的曝光時(shí)間（使用中性密度過(guò)濾器，以減少照明強(qiáng)度），在圖7（a）的顯微照片是黑暗的，缺乏陰影細(xì)節(jié)，典型的互易律失效暴露幾分鐘的薄膜上。 在色彩搭配上藍(lán)******調(diào)被抑制也有一個(gè)明顯的轉(zhuǎn)變。 通過(guò)減小曝光時(shí)間（或去除的中性密度過(guò)濾器），在圖7（b）的顯微照片，它顯示了良好的曝光的結(jié)果，精確的色彩重現(xiàn)的鋒利的試片細(xì)節(jié)。 在很短的曝光時(shí)間（圖圖7（c）），再倒易律失效的發(fā)生是由于曝光不足，顯微照片是黑暗的，缺乏陰影細(xì)節(jié)。

中性密度過(guò)濾器，通?？梢允褂门c成功的調(diào)制很短的曝光時(shí)間，以避免互易律失效。 然而，護(hù)理時(shí)應(yīng)使用中性密度濾光片的彩色顯微攝影曝光時(shí)間調(diào)整。 年齡較大的中性密度過(guò)濾器可能會(huì)取得其隨著年齡的微黃色調(diào)，一些便宜的過(guò)濾器，也有某種程度的背景顏色。 如果中性密度濾光片的引入到不正確的色彩平衡已被仔細(xì)校準(zhǔn)顯微鏡（參見(jiàn)圖圖3（a））的光學(xué)路徑的查詢結(jié)果中，使用顏色補(bǔ)償過(guò)濾器，以返回到它的適當(dāng)?shù)钠胶?，在顯微鏡的照明。 此光學(xué)因素，如內(nèi)部散射和反射，可能會(huì)影響中性密度濾光片的有效密度，導(dǎo)致它們從測(cè)得的密度變化。 出于這個(gè)原因，重要的是要校正的關(guān)鍵顯微攝影的中性密度濾光片。

有很多種其他因素影響顯微攝影時(shí)，使用顏色的透明度和負(fù)片色彩平衡。 顏色響應(yīng)受制造膠片感光特性的變化，如厚度，ISO值和色彩保真度。 乳劑厚度波動(dòng)是罕見(jiàn)的，但他們確實(shí)發(fā)生了，可能會(huì)影響在顯微照片的色彩平衡。 膜制造商允許的變化程度通常是小于的柯達(dá)雷登CC10補(bǔ)償濾波器的效果，使這些過(guò)濾器可使用的乳化劑和ISO變化的校正。 由于乳液的波動(dòng)可以不同的六種顏色（紅色，綠色，藍(lán)色，青色，品紅色，和黃色）中的任何一個(gè)，這是一個(gè)好主意，有這些過(guò)濾器的一組完整的手頭。

彩色膠片可以儲(chǔ)存條件不當(dāng)也會(huì)影響色彩平衡，有時(shí)是無(wú)法糾正的色彩補(bǔ)償濾鏡或改變曝光時(shí)間點(diǎn)。 這是通常的情況下，膜已被破壞時(shí)，通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的高溫和/或高濕度，如條件時(shí)經(jīng)常發(fā)生的彩色膠片實(shí)驗(yàn)室的貨架上存放很長(zhǎng)時(shí)間。 彩色膠片比黑白膠片溫度和濕度的損壞更敏感，因?yàn)槊總€(gè)三色感光乳劑層，在這些條件下將有不同的反應(yīng)。 膠片存放不當(dāng)?shù)挠绊懯遣豢深A(yù)知的，可能表現(xiàn)出來(lái)的色彩平衡，成膜速度快，或圖像的對(duì)比度的變化。 前和暴露后，在冰箱中存儲(chǔ)電影，它始終是一個(gè)好主意，特別是如果電影不能立即被處理。

有害化學(xué)品的膜，或過(guò)量的光的曝光，因此也有有害的影響的顯微照片，這可能是困難的，如果不是不可能的，以糾正。 電影不應(yīng)該被存放在通風(fēng)櫥或其他地方可能會(huì)受到攻擊揮發(fā)性液體和氣體，如甲醛，丙酮或******。 任何特定的化學(xué)物質(zhì)可能對(duì)一個(gè)給定的膠片感光乳劑的影響是不可預(yù)知的。 電影速度可以增加或減少，可以顯著影響的色彩平衡和對(duì)比度通常會(huì)丟失。 另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的危險(xiǎn)，尤其是在生物化學(xué)，分子生物學(xué)，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，是無(wú)意中暴露膜高強(qiáng)度的輻射來(lái)源。 這些源包括鈷-60同位素，鐳，和X-射線，通常用在醫(yī)院和一些研究實(shí)驗(yàn)室。 在機(jī)場(chǎng)的行李掃描儀還提供了一個(gè)輻射危害。 為了避免曝光的電影有潛在危害的輻射來(lái)源，不存儲(chǔ)電影的地方正在使用輻射或放射性化學(xué)品被安置。 保護(hù)膜（既暴露和未曝光），無(wú)論是鉛或混凝土屏蔽，在適當(dāng)?shù)那闆r下，將存儲(chǔ)薄膜盡快進(jìn)入流通領(lǐng)域。

膜乳劑的特性隨時(shí)間變化的，所以大多數(shù)薄膜加蓋在制造過(guò)程中的過(guò)期日期。 如果適當(dāng)?shù)乇４嬖诒浠虮?，膜的壽命可以大大增加?/span> 電影應(yīng)該被放置在密封的容器（鎖定保鮮袋或不透氣的塑料容器就足夠了），小心存放于低流量區(qū)域的冰柜或冰箱，直到它準(zhǔn)備要暴露。 膜從冷庫(kù)中取出后，總是讓電影前幾個(gè)小時(shí)開(kāi)放的存儲(chǔ)容器，以避免受潮損壞，平衡至室溫。 如果妥善保存，膜往往會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)*出了建議的截止日期延長(zhǎng)期間好。

顯微照片很暗或沖了出去 -曝光的錯(cuò)誤可能會(huì)導(dǎo)致的顯微接收光照不足或太多造成，要么很暗或沖了出去，缺乏標(biāo)本高亮細(xì)節(jié)的圖像。 的試樣的平均亮度，視各不相同，通常感興趣的區(qū)域是不具有代表性的平均場(chǎng)亮度。 作為一個(gè)例子，在暗視野顯微鏡標(biāo)本是明亮的光在黑暗的背景上，影像將被過(guò)度曝光，如果不計(jì)算曝光補(bǔ)償測(cè)光表讀數(shù)。 由此產(chǎn)生的顯微照片，呈現(xiàn)明亮的標(biāo)本沖了出去，缺乏細(xì)節(jié)。 這個(gè)錯(cuò)誤可以得到補(bǔ)償所使用的現(xiàn)場(chǎng)儀表直接放在明亮的標(biāo)本來(lái)衡量增加了相機(jī)的膠片速度指標(biāo)，以減少曝光時(shí)間，曝光時(shí)間，或（如果點(diǎn)測(cè)光不可用）。 膠片曝光詳盡地討論在另一部分的奧林巴斯顯微鏡資源中心顯微鏡底漆 。

圖8顯示了一系列的顯微照片，示出*常見(jiàn)的曝光膠片的顏色透明與發(fā)生的錯(cuò)誤。 試樣是一個(gè)60X的目標(biāo)與校正領(lǐng)干玉米（玉米或玉米）組織拍攝的彩色薄款。 適當(dāng)?shù)恼彰魉居傻膱D中的圖像（圖8（b））。 圖8（a）表示棉鈴蟲(chóng)當(dāng)薄膜沒(méi)有收到足夠的光線適當(dāng)?shù)乇┞度橐?，和曝光不足的錯(cuò)誤發(fā)生在非常暗的圖像所導(dǎo)致的薄膜部。 曝光不足膜會(huì)留下陰影區(qū)域太暗，缺乏細(xì)節(jié)和高光區(qū)的通常呈現(xiàn)深淺不一的黃色和灰色。 彩色透明膠片曝光誤差也不是很寬容的，只會(huì)產(chǎn)生可接受的結(jié)果，在一個(gè)半到一個(gè)正確的曝光F-停止。 通常在顯微鏡，平均標(biāo)本亮度可能不會(huì)在整個(gè)視場(chǎng)是均勻的，并可能被包圍在明亮的背景中出現(xiàn)的細(xì)節(jié)，小暗的功能。 這帶來(lái)的問(wèn)題時(shí)，使用相機(jī)的自動(dòng)曝光功能，平均*過(guò)30-100％的視場(chǎng)面積測(cè)量曝光。 這些均可能導(dǎo)致曝光不足的標(biāo)本有非常明亮的背景。 使用點(diǎn)測(cè)光（如果有的話），以緩解這一問(wèn)題，或者如果電表平均視場(chǎng)較大部分，調(diào)整膠片速度設(shè)置，以提高曝光。 使用手動(dòng)相機(jī)，增加曝光時(shí)間，或減少膠片速度調(diào)整，增加曝光。 F-STOP增量三分之一校準(zhǔn)包圍曝光的新標(biāo)本和電影，它始終是一個(gè)好主意。 中包括的中位數(shù)為每個(gè)支架的每一側(cè)上的至少兩個(gè)或三個(gè)曝光，并保持這樣的暴露試驗(yàn)的準(zhǔn)確記錄，以備將來(lái)參考。

（三）在圖8中的圖像出現(xiàn)非常薄的洗滌，由于膜的曝光過(guò)度。 過(guò)度曝光影響較輕的部分的電影，遭受顯著或圖像細(xì)節(jié)的損失總額。 發(fā)生此錯(cuò)誤的原因是電影接收太多的光線，通常是由于快門(mén)速度太長(zhǎng)或過(guò)量的光照強(qiáng)度。 鹵鎢燈（12伏，50 - 或100瓦），應(yīng)調(diào)整到*佳顯微攝影色溫和照度之間的設(shè)置為8.5伏和9.0伏。 如果整卷被過(guò)度曝光時(shí)，故障可能是相機(jī)系統(tǒng)上的曝光設(shè)置。 觀察相機(jī)的ISO指標(biāo)，看它是否符合電影的速度，并檢查，看是否正確設(shè)置快門(mén)速度。 自動(dòng)攝像系統(tǒng)可以過(guò)度曝光的膜如果太長(zhǎng)照明量的*低設(shè)置的快門(mén)速度。 中性密度濾光片，減少照明強(qiáng)度和執(zhí)行測(cè)試?yán)ㄌ?hào)曝光設(shè)置撥號(hào)時(shí)使用新的標(biāo)本或電影。

另一種常見(jiàn)的風(fēng)險(xiǎn)可能會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題自動(dòng)攝影機(jī)深深的顏色時(shí)，過(guò)濾器是用來(lái)控制對(duì)比度黑白顯微攝影。 整個(gè)可見(jiàn)光光譜光電池或光電二極管在這樣的相機(jī)可能無(wú)法以統(tǒng)一的方式回應(yīng)，并產(chǎn)生不正確的曝光計(jì)算，導(dǎo)致顯微照片是不是太亮或太暗。 曝光校正的過(guò)濾器，使用預(yù)定的過(guò)濾器的因素，討論了在膠片曝光部分。 始終保持正確的曝光，以確保高質(zhì)量的顯微照片的彩色濾光片的曝光信息的準(zhǔn)確記錄。 自動(dòng)相機(jī)光電二極管也可能是敏感的極化效應(yīng)，偏振光顯微鏡中經(jīng)常遇到的。 使用相同的策略，并保持與彩色濾光片曝光信息的記錄。

相位差板使用偏振光或微分干涉對(duì)比，也能引起曝光不足的問(wèn)題，尤其是當(dāng)光電二極管的靈敏度可能不會(huì)是均勻的在整個(gè)可見(jiàn)光光譜或檢測(cè)器是敏感的極化效應(yīng)。 在這些條件下，曝光時(shí)間的確定應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)，使用括號(hào)，自動(dòng)相機(jī)系統(tǒng)推薦的曝光。 用手動(dòng)相機(jī)拍攝標(biāo)本時(shí)，始終使用括號(hào)。

當(dāng)薄膜是很暗或全黑，有一種可能性，即它沒(méi)有被暴露。 這可能是表示與電影提前機(jī)制自動(dòng)相機(jī)或相機(jī)的快門(mén)系統(tǒng)故障的一個(gè)嚴(yán)重的問(wèn)題。 如果整卷的未曝光，但相機(jī)似乎是正常顯微攝影過(guò)程中，檢查做出一定的攝像頭所接收光顯微鏡。 也可以通過(guò)檢查卷取軸，以確保其正常工作和電影是否正確連接。 許多自動(dòng)曝光系統(tǒng)不會(huì)允許薄膜被暴露當(dāng)正在接收光線不足時(shí)，但較舊的手動(dòng)系統(tǒng)沒(méi)有這個(gè)安全功能。 在未曝光膠卷，只有一個(gè)或幾個(gè)幀，檢查攝像頭，以確保電影推進(jìn)。