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重組DNA技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)允許利用植物用于生產(chǎn)生物制藥。 相對于其他生產(chǎn)平臺，植物便宜，易于擴展和缺乏人類病原體。 此外，由于植物是真核生物它們可以處理和修改復雜的人類蛋白質(zhì)。在這里，我們調(diào)查紅色熒光蛋白的命運，在相同的監(jiān)管信號，植酸酶在雙子葉植物煙草表達。

介紹

N-糖基化是的研究的翻譯后修飾之一，并可以具有生物活性的一個顯著影響，靶向和治療性糖蛋白的藥物動力學行為。 寡甘露糖型（OMT）N-聚糖可以通過使用C端ER-的方法使信號（H / KDEL）靶向重組蛋白積聚在ER來制造。

靶向裂解或貯藏液泡的糖蛋白含有paucimannosidic N-聚糖而那些靶向到細胞外空間包含任一終端葡萄糖-NAC殘基，除了植物特定的核心巖藻糖和木糖或包含進一步擴展，例如路易斯一個決定因素。（奧林巴斯顯微鏡）

雖然ER靶向通常優(yōu)選，因為它導致更高的蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和產(chǎn)率，在某些情況下的OMT N-聚糖的存在并不總是理想的藥物蛋白。其他報告表明特定的植物paucimannosidic N-聚糖是可取的，已涉及到重組蛋白的治療效率的增強。

因此，亞細胞定位和沉積部位已成為生產(chǎn)藥品的一個重要考慮因素。 在我們的組完成先前的研究表明，重組真菌植酸酶攜帶信號肽并沒有進一步的靶向信號被小區(qū)內(nèi)的在谷物胚乳的蛋白質(zhì)貯藏液泡沉積。

圖1：紅色熒光蛋白定位于煙草。 A.熒光顯微鏡，B，C電子顯微鏡，B'，C'。 共聚焦顯微鏡，。 A.葉表皮，看到紅色熒光蛋白的質(zhì)外體（箭頭）的積累。 B，B'。 種子胚，細胞壁（CW，箭頭）上顯著信號。 C，C'。 種子胚乳。 見的質(zhì)外體中的標記（CW，箭頭）以及在所述細胞（C'，箭頭）內(nèi)的一些結(jié)構(gòu)。 酒吧2微米（A，B'，C'），0.25微米（B，C）。

結(jié)果與討論

圖1顯示重組DsRed的在煙草細胞的沉積。 重組紅色熒光蛋白攜帶的信號肽并沒有進一步的目標信號被組成型表達煙草。 紅色熒光蛋白的熒光在葉片中觀察到體內(nèi)的Leica DM5000（A）中，而被的Leica SP2共聚焦顯微鏡下觀察種子（B'，C'）。

對于電子顯微鏡（B，C），小件煙葉，以及去除涂層煙草種子固定在4％多聚甲醛和0.5％戊二醛。 通過乙醇系列脫水后，將樣品滲透并包埋在LRWhite樹脂和塊被允許進行聚合在60℃下2天。 超薄切片（80納米）得到用Leica ULTRACUT UCT并收集在金網(wǎng)格和用重組的紅色熒光蛋白免疫定位后飛利浦EM-400型電子顯微鏡觀察。

在葉epidermical細胞（圖1A）的周圍的熒光表明重組DsRed的被有效地經(jīng)由營養(yǎng)組織默認途徑分泌，類似煙葉其它重組蛋白質(zhì)或在稻葉。紅色熒光蛋白也有效地分泌在煙草胚（圖1B，B'）和豐富金探針可以觀察到裝飾胚胎細胞壁。 無顯著信號可與油體或細胞（圖1B，B'）的任何其他隔室中被觀察到。 在胚乳，顯著標簽也可以表明該蛋白被分泌（圖1C，C'）的細胞壁內(nèi)觀察到。 然而，一些熒光結(jié)構(gòu)（可能的蛋白質(zhì)貯藏液泡）可以在胚乳細胞（圖1C'）內(nèi)進行觀察。

有趣的是說，在煙草的胚乳，作為谷物的種子，是一個短命的終端組織專門存放食品將無法生存發(fā)芽。 谷類淀粉胚乳細胞意思是死在萌發(fā)和水解酶的動員儲備的發(fā)芽過程中糊粉細胞分泌的，而雙子葉植物的種子的成熟胚乳細胞通常包括活細胞分泌，這將需要以降解胚乳水解酶細胞壁以允許胚根出現(xiàn)。

我們的結(jié)果證實了在單子葉植物和雙子葉植物胚乳組織之間的生理差異。 而在谷物重組植酸酶和重組抗-HIV抗體2G12被定向到PSV船，紅色熒光蛋白在煙草胚乳僅部分保留下來，像也報道了上述重組蛋白。

不同的定位在不同的組織和物種的結(jié)果在不同的糖形的重組蛋白，因此，應(yīng)考慮到的帳戶時談到選擇一個平臺，藥品在植物中生產(chǎn)。