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尼康顯微鏡綠色激發(fā)塊Cy3 HYQ（帶通）

都為尼康Cy3的紫外線，可見光和近紅外透射光譜曲線（高性能設置與尼康HYQ）濾波器組合下面示于圖1.該濾波器組是兩個在Nikon綠色激發(fā)系列1那采用的帶通發(fā)射（阻擋）濾波器而不是一個長通型，并且按照設計，有效地限制了從熒光團發(fā)射外目標的光譜的波長范圍的干擾。 如同在HYQ系列的其它的過濾器，切割上和截止轉(zhuǎn)換在Cy3 HYQ濾波器的斜率很陡（只有幾個大小納米），以幫助減少排放交叉，并通過頻帶為擴大收集更多的信號。

綠色激發(fā)濾波器模塊的Cy3（HYQ）規(guī)格：

• 激發(fā)波長篩選：530-560納米（帶通，545 CWL）

• 雙色鏡截止波長：570納米（長通，LP）

• 屏障過濾波長：573-648納米（帶通，610 CWL）

所述的Cy3熒光濾波器組合（如以上所討論，尼康HYQ高性能干涉濾光器系列中的一員）是在結(jié)構(gòu)上的標準的帶通發(fā)射綠色激發(fā)組（G-2E / C）的相似，但具有更寬的帶通的窗口的激發(fā)和發(fā)射（屏障）的過濾器。 這些高性能的過濾器被制造具有更大數(shù)目同時在激發(fā)和發(fā)射濾光片干涉腔，允許頻譜輪廓之間的更接近而不遭受過度的串音。 該二色鏡截止波長是570納米，并且是結(jié)合了介質(zhì)30納米激發(fā)通帶（530-560納米）連同一個非常廣泛的75納米的發(fā)射通帶（573-648納米）。 該組能夠有選擇性的激勵和檢測在多個標記實驗中使用的具體流行熒光團，并且通常適用于廣泛范圍的由綠色的波長激發(fā)探針。

所述的Cy3 HYQ濾波器組合，推薦用于與花青熒光探針的Cy3使用，并且被設計成減少或消除從熒光團發(fā)射的紅光和近紅外干擾時的探針，如四甲異硫氰酸酯（TRITC）和DII中的多個標記中使用技術(shù)。 所述的Cy3 HYQ濾波器集合可以用基本相同的熒光染料為G-2E / C組合被利用，并產(chǎn)生，相比之下，由于增加的激發(fā)和發(fā)射能量稍微明亮的圖像所允許的更寬的帶通的窗口。 此外，發(fā)射帶通到較低的波長的延伸，相對于G-2E / C組，產(chǎn)生具有色調(diào)圖像移向橙色和黃色。 Cy3的，Cy3.1.8，吖啶紅，將Alexa Fluor 546，的Alexa Fluor 555，茜素紅，BODIPY探頭，鈣橙，DiI標記，DiIC16，DiIC18，溴化乙錠，NeuroTrace 530 /：學習以下的熒光基團，當Cy3的HYQ集推薦615，碘化丙啶，派洛寧B，RedoxSensor紅CC-1，羅丹明衍生物，塞夫龍河艷紅和TRITC。 在圖2中呈現(xiàn)的圖像表明具有多種針對不同細胞內(nèi)位置吸收綠光的熒光探針的這種過濾器組合的性能。

如圖2（a）是沾上MitoTracker紅CMXRos，它的目標細胞內(nèi)的線粒體的網(wǎng)絡牛肺動脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)的熒光發(fā)射強度。 *大吸收MitoTracker紅CMXRos的是579納米，并且*大發(fā)射發(fā)生在599納米。 另外，將試樣同時用DAPI染色（在細胞核靶向DNA;藍色發(fā)光）和BODIPY FL-phallacidin（靶向肌動蛋白;綠色發(fā)光）。 注意沒有信號從藍色（DAPI）和綠（BODIPY）熒光團，但明亮的橙黃色熒光由管狀線粒體發(fā)揮。

印度麂的鹿皮沾上的Alexa Fluor 568綴合鬼筆環(huán)肽，其結(jié)合到細胞內(nèi)絲狀肌動蛋白網(wǎng)絡的成纖維細胞的培養(yǎng)，是在圖2（b）中。 *大吸收的Alexa Fluor 568的是578納米，并且*大發(fā)射發(fā)生在603納米光譜的橙色區(qū)域。 另外，將試樣同時用DAPI染色（在細胞核靶向DNA;藍色發(fā)光）和MitoTracker綠FM（靶向線粒體;綠色發(fā)光）。 注意沒有信號從綠色（MitoTracker）和藍色（DAPI）的熒光團，它們是不能有效地激發(fā)在綠色波長，但明亮的橙紅色熒光的肌動蛋白絲發(fā)揮。(奧林巴斯顯微鏡)

由薄小鼠腸的部分沾上的Alexa Fluor 350麥胚凝集素，藍色熒光的凝集素特定于杯狀細胞的粘液中演示了圖2的（c）的熒光發(fā)射強度。 另外，將試樣同時沾上的Alexa Fluor 568鬼筆環(huán)肽（絲狀肌動蛋白; 600納米發(fā)射）和SYTOX綠（核; 504納米激發(fā)和523納米發(fā)射）。 注意背景噪聲相比于其他尼康長通濾波器的組合（G-2A和G-2B），并在顯著量的Alexa Fluor 568顯示的圖像中所產(chǎn)生的黃-紅信號的低電平。

示于圖2（d）是HeLa細胞免疫熒光標記的同隨后綴合的Alexa Fluor 546的吸收*大值的Alexa Fluor 546山羊抗-小鼠Fab片段初級抗組蛋白（鍋）鼠單克隆抗體的556納米，并且發(fā)射*大值出現(xiàn)在573毫微米（在可見光光譜的黃色區(qū)域）。 *抗體，從HeLa細胞的純化核級分生產(chǎn)，特異性結(jié)合的抗原決定簇，其存在于所有五個組蛋白（H1，H2A，H2B，H3和H4）。 請注意，從發(fā)生有絲分裂的細胞中強橙黃色熒光強度，但間期核的降低排放強度。

在圖2（e）在對女兒鼠袋鼠（PTK2）上皮細胞，示出，分別是那些在被免疫熒光標記的同隨后綴合的山羊抗小鼠Fab片段初級抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體的培養(yǎng)到的Alexa Fluor 546的吸收*大值的Alexa Fluor 546的是556納米，并且*大發(fā)射發(fā)生在573納米（在可見光光譜的黃色區(qū)域）。 需要注意的是在整個細胞質(zhì)中延伸的細胞內(nèi)微管網(wǎng)絡的突出黃橙色染色。

自體熒光發(fā)射強度從松（ 火炬松 ）花粉粒是表現(xiàn)在圖2（F）。 在植物組織中的內(nèi)源性的自發(fā)熒光產(chǎn)生于各種生物分子，包括葉綠素，β-胡蘿卜素，葉黃素和。 在藍紫色區(qū)域中，葉綠素具有吸收帶，具有高消光系數(shù)，并產(chǎn)生一個顯著量熒光在與400和440納米之間的波長激發(fā)。注意自發(fā)熒光發(fā)射強度中的橙色和紅色光譜區(qū)域的存在，這是強烈讓人想起暗視場圖像的。