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Plant Growth and C*tion科研級(jí)植物培養(yǎng)系統(tǒng)方案

2023年08月24日 15:30:35      來(lái)源:北京易科泰生態(tài)技術(shù)有限公司 >> 進(jìn)入該公司展臺(tái)      閱讀量:25

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Plant Growth and C*tion科研級(jí)植物培養(yǎng)系統(tǒng)方案

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植物培養(yǎng)是生物實(shí)驗(yàn)室最重要的常規(guī)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)之一。以前的研究中,只要求培養(yǎng)系統(tǒng)能夠使種子萌發(fā)、基本滿足植物的生長(zhǎng)即可。但在真正嚴(yán)格的植物生理生態(tài)研究中,傳統(tǒng)培養(yǎng)箱由于種種原因是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能達(dá)到要求的。

本文將系統(tǒng)介紹一系列基于LED光源的科研級(jí)植物培養(yǎng)方案,包括SL3500植物培養(yǎng)LED光源、FytoScope植物生長(zhǎng)箱等。這些培養(yǎng)方案和儀器是由歐洲植物生理科學(xué)家直接參與設(shè)計(jì)的,才能夠真正進(jìn)行精確的科研實(shí)驗(yàn)

一、現(xiàn)代科研級(jí)植物培養(yǎng)的技術(shù)要求

1.光源

,光是植物生長(zhǎng)中最重要的環(huán)境因子之一,它不僅為植物光合作用提供輻射能,還為植物提供信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),調(diào)節(jié)其發(fā)育過(guò)程。植物在它的整個(gè)生命周期中始終處于一個(gè)不斷變化的光環(huán)境中,在長(zhǎng)期的進(jìn)化中,植物不僅適應(yīng)了光環(huán)境的變化,而且還能相互影響而改變周圍的光環(huán)境。因此,培養(yǎng)箱光源就是決定其重要的部分。

1)光質(zhì)

到達(dá)地面的太陽(yáng)光波長(zhǎng)大約從300~2600nm,其中對(duì)光合作用的有效波長(zhǎng)在400~700nm之間,其中425~490nm的藍(lán)光以及610~700nm的紅光對(duì)光合作用貢獻(xiàn)率,而520~610nm(綠色)的光線被植物吸收的比率很低(閆新房,2009)。

LED(1ight—emitting diodes),即發(fā)光二極管的一大特點(diǎn)就是可以發(fā)射出純度的單色光(圖1)。因此從LED誕生之初,紅光和白光LED就被用于植物培養(yǎng)。

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圖1. FytoScope LED光源的單色光光譜

在很多研究中,科學(xué)家希望盡量模擬自然太陽(yáng)光來(lái)培養(yǎng)植物。由圖2中可以看到白熾燈和熒光燈雖然發(fā)出的都是白光,實(shí)際上其光譜都與太陽(yáng)光譜有很大差異。與太陽(yáng)光譜類似的就是鹵光燈和白光LED。但是,鹵光燈由于有相當(dāng)一部分能量都用于發(fā)射植物不能利用的750-2600nm波段近紅外輻射。美國(guó)GE公司的資料指出這部分能量占到總輻射能量的76%。同時(shí),近紅外輻射又會(huì)有的光輻射增溫效應(yīng),長(zhǎng)時(shí)間照射會(huì)對(duì)培養(yǎng)的植物造成損傷。而LED光源的一大優(yōu)點(diǎn)就是發(fā)熱量極少。這從圖2的光譜圖中也可以看到白光LED的近紅外輻射是極低的。

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圖2.不同光源光譜圖,上左:太陽(yáng)光;上中:白熾燈;上右:熒光燈(日光燈);下左:鹵光燈;下中:冷白光LED;下右:暖白光LED

光除了給植物提供能量,還會(huì)直接通過(guò)光敏色素和隱花色素來(lái)調(diào)節(jié)植物的多種生理反應(yīng)(圖3)。光敏色素有兩個(gè)互變異構(gòu)體——紅光光敏色素(Pr)和遠(yuǎn)紅光光敏色素(Pfr)。Pr吸收波長(zhǎng)為660 Bin左右的紅光,Pfr吸收波長(zhǎng)為730nm左右的遠(yuǎn)紅光。光敏色素調(diào)節(jié)多種不同植物對(duì)光的反應(yīng),包括光周期,種子萌發(fā)、展葉、下胚軸伸長(zhǎng)和脫黃化。隱花色素則吸收藍(lán)光和紫外光范圍的光波。

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圖3.光敏色素與激素的交互作用(Jaillais, 2010)

因此FytoScope在白光LED和紅藍(lán)LED以外,還配備了遠(yuǎn)紅光光源。除了為植物生長(zhǎng)提供的光質(zhì),同時(shí)滿足植物光形態(tài)建成的需要。另外,F(xiàn)ytoScope可以提供綠光LED與紅藍(lán)LED組成三原色光源系統(tǒng),通過(guò)調(diào)整三原色的比例,能夠發(fā)出可見(jiàn)光譜中任意一種顏色的光,用于不同光質(zhì)對(duì)植物影響的研究(圖4)。

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圖4. 不同光源下擬南芥的成長(zhǎng)狀況及生理指標(biāo)

2)光強(qiáng)

白熾燈、鹵鎢燈光效為12-24lm/W,熒光燈50-70lm/W,鈉燈90-140lm/W,大部分的耗電變成熱量損耗。而理論上LED發(fā)光源光效可達(dá)到300lm/W。

FytoScope LED光源植物培養(yǎng)箱可以在30-50cm的距離上實(shí)現(xiàn)2000µmol(photons)/m2.s的光強(qiáng),SL3500 LED光源甚至能達(dá)到3000µmol(photons)/m2.s以上的光強(qiáng),滿足從藻類、擬南芥到小麥、玉米、水稻等高耐光植物的培養(yǎng)需求,并能夠進(jìn)行各種高光/低光脅迫實(shí)驗(yàn)。

3)光源與溫濕度的調(diào)控

傳統(tǒng)光源中,熒光燈不能調(diào)控光強(qiáng),只能通過(guò)增加或減少燈管數(shù)量來(lái)粗略控制光強(qiáng),并不能進(jìn)行精確實(shí)驗(yàn)。白熾燈、鹵鎢燈雖然可以調(diào)節(jié)光強(qiáng),但是由于光譜、光輻射升溫等原因,并不是很適用于植物培養(yǎng)。

FytoScope可以分別精確控制每種單色光的光強(qiáng)、光照時(shí)間,并可以通過(guò)軟件實(shí)現(xiàn)動(dòng)態(tài)無(wú)級(jí)調(diào)控,模擬晝夜周期變化、日升日落等自然界中光環(huán)境變化,以及其他各種任意變化。同時(shí)溫濕度也可以隨著光強(qiáng)同步變化,模擬晝夜周期中氣溫的變化(圖5)。

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圖5. FytoScope軟件中編制的晝夜周期,并模擬日升日落

4)LED光源的其他優(yōu)點(diǎn)

①使用電源電壓較低,供電電壓僅為6-24 V,比使用高壓電源更安全;

②節(jié)能高效,耗電量?jī)H為白熾燈的八分之一,熒光燈的二分之一;

③可以在極短時(shí)間內(nèi)發(fā)出脈沖光,響應(yīng)時(shí)間快;

④體積小、結(jié)構(gòu)緊湊、穩(wěn)定性強(qiáng);

⑤無(wú)污染,作為全固體發(fā)光體,不含金屬汞、耐沖擊、不易破碎、廢棄物可回收,是一種綠色照明產(chǎn)品;

⑥壽命長(zhǎng),可達(dá)50 000小時(shí)以上,是普通照明燈具的幾十倍。

2.通風(fēng)換氣與培養(yǎng)氣體成分控制

傳統(tǒng)培養(yǎng)箱的通風(fēng)換氣是通過(guò)風(fēng)扇來(lái)完成的,培養(yǎng)箱體積越大,需要的風(fēng)扇就越大。這樣會(huì)在培養(yǎng)箱內(nèi)形成很強(qiáng)的氣流,這對(duì)培養(yǎng)植物的生長(zhǎng)反而造成了一定的干擾和脅迫。FytoScope使用了新式的層流式換氣系統(tǒng),確保培養(yǎng)箱中的氣流速度不高于0.25 m/s,消除了換氣氣流對(duì)植物造成的影響。

傳統(tǒng)培養(yǎng)箱只能給植物提供自然環(huán)境中的空氣,氣體成分變化很大,更不要說(shuō)對(duì)成分進(jìn)行控制。但對(duì)于很多研究溫室效應(yīng)或者其他氣體對(duì)植物影響的科學(xué)家,他們需要精確控制培養(yǎng)植物的氣體組分。FytoScope配備了GMS150高精度氣體混合系統(tǒng),可控制最多4種生長(zhǎng)箱中的氣體濃度。標(biāo)配版可控制空氣/氮?dú)夂虲O2,也可以根據(jù)用戶需要配置其他氣體的控制功能。系統(tǒng)中內(nèi)置高精度質(zhì)量流量計(jì),調(diào)控精度高于±2%,穩(wěn)定性高于±0.1%。在研究溫室效應(yīng)時(shí),可以將CO2濃度精確控制到ppm級(jí)。

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圖6.左:配備GMS150的FMT150藻類培養(yǎng)與在線監(jiān)測(cè)系統(tǒng);右:配備GMS150的FytoScopeLED光源生長(zhǎng)箱

3.植物生理與表型監(jiān)測(cè)

傳統(tǒng)培養(yǎng)箱只能對(duì)植物進(jìn)行一般性培養(yǎng),并不能在培養(yǎng)過(guò)程中自動(dòng)獲得植物生長(zhǎng)相關(guān)的生理生態(tài)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù),還需要研究人員將植物取出手動(dòng)測(cè)量。不但耗費(fèi)人力,而且還會(huì)對(duì)植物的培養(yǎng)過(guò)程造成干擾。

FytoScope配備了MP100葉綠素?zé)晒庾詣?dòng)監(jiān)測(cè)儀。MP100內(nèi)置有目前國(guó)際上熒光研究的幾乎所用測(cè)量程序,包括Ft、QY、OJIP、NPQ、光響應(yīng)曲線??梢杂糜诠夂匣钚匝芯?、自然環(huán)境條件下植物光合能力的長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)、植物脅迫檢測(cè)、除草劑測(cè)試、人工或野外條件下的植物生長(zhǎng)情況監(jiān)測(cè)等。

研究者可以通過(guò)FytoScope設(shè)計(jì)不同的晝夜周期、光質(zhì)/光強(qiáng)變化、高溫/低溫脅迫、氣體組分等實(shí)驗(yàn),再通過(guò)MP100實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)植物熒光生理指標(biāo),進(jìn)而完成一個(gè)完整的植物生理實(shí)驗(yàn)。這使得FytoScope單獨(dú)完成一個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程,成為真正的科研儀器,而不同于傳統(tǒng)培養(yǎng)箱僅僅是培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)材料的工具。

對(duì)于大型生長(zhǎng)室來(lái)說(shuō),還可以與PlantScreen高通量植物表型分析系統(tǒng)聯(lián)合工作。PlantScreen高通量植物表型分析系統(tǒng)是的植物表型與作物育種研究技術(shù)的集大成者。它整合了LED植物智能培養(yǎng)、自動(dòng)化控制系統(tǒng)、RGB 真彩 3D 成像、葉綠素?zé)晒獬上駵y(cè)量分析、植物熱成像分析、植物近紅外成像分析、植物高光譜分析、自動(dòng)條碼識(shí)別管理、自動(dòng)稱重與澆灌系統(tǒng)等多項(xiàng)*技術(shù),以化的方式實(shí)現(xiàn)大批量植物樣品——從模式植物擬南芥到大型農(nóng)作物如小麥、玉米到的生理生態(tài)與形態(tài)結(jié)構(gòu)成像分析,可以對(duì)植物表型組進(jìn)行全面、自動(dòng)、高通量且無(wú)人值守的長(zhǎng)期研究分析,可以獲取和研究植物整個(gè)生活史的生理變化和表型分析的所有相關(guān)海量數(shù)據(jù)。在國(guó)際上已經(jīng)裝備到許多科研院所和孟山都等多家跨國(guó)種業(yè)公司,是目前國(guó)際上應(yīng)用、技術(shù)面的高通量植物表型分析系統(tǒng)。

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圖7. PlantScreen高通量植物表型分析系統(tǒng)

二、植物培養(yǎng)系統(tǒng)方案

1. 光源

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SL3500 智能LED光源:

§ 適用于培養(yǎng)單株或多株小型植株、藻類,配備支架,可單獨(dú)工作

§ 光強(qiáng)可達(dá)3000µmol(photons)/m2.s,均一性光照,精確調(diào)控

§ 可定制單色、雙色或三色光源,光譜從UVA到遠(yuǎn)紅光可選

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Fyto-Panels智能LED光源

§ 適用于培養(yǎng)架、培養(yǎng)室進(jìn)行大量培養(yǎng)

§ 在100cm距離上光強(qiáng)達(dá)280-1500µmol(photons)/m2.s,均一性光照,精確調(diào)控

§ 標(biāo)配冷白+遠(yuǎn)紅LED,其他光源可定制

2. FytoScope植物生長(zhǎng)箱

FytoScope配備有多種尺寸型號(hào),滿足不同用戶的需求。其內(nèi)部容積如下:

§ FS 130:124L

§ FS 360:290L

§ Reach-In FytoScope:900L

§ Step-In FytoScope:3400L/4400L

§ Walk-In FytoScope:超大型版,尺寸可定制,可與PlantScreen植物表型成像分析系統(tǒng)組合成為更*的研究分析系統(tǒng)。

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圖8. 上左:FS 130;上右:FS 360;中左:Reach-In FytoScope;中右;Step-In FytoScope;下:與PlantScreen植物表型成像分析系統(tǒng)組成聯(lián)合系統(tǒng)的Walk-In FytoScope

技術(shù)特點(diǎn):

§ 全LED光源,標(biāo)配冷白+遠(yuǎn)紅LED,其他光源可定制

§ 30-50cm的距離上光強(qiáng)可達(dá)2000µmol(photons)/m2.s

§ 光照、溫度、濕度可分別同步自動(dòng)調(diào)控

§ 層流式通風(fēng)系統(tǒng),消除了換氣氣流對(duì)植物造成的影響

§ 可添加搖床進(jìn)行藻類培養(yǎng)

§ 配備葉綠素?zé)晒獗O(jiān)測(cè)模塊,可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)植物光合生理和生長(zhǎng)狀況

§ 配備GMS150高精度氣體混合系統(tǒng),精確調(diào)控氣體組分,可進(jìn)行溫室效應(yīng)等研究

§ 配備專用軟件,用戶自定義編程控制并實(shí)時(shí)記錄環(huán)境數(shù)據(jù),可實(shí)現(xiàn)無(wú)人值守長(zhǎng)期培養(yǎng)

3. 大型生長(zhǎng)室

§ clip_image018.png根據(jù)客戶實(shí)際情況量身定制

§ 在線控制與實(shí)時(shí)環(huán)境監(jiān)測(cè)

§ 自動(dòng)光照、溫濕度、CO2調(diào)控

§ 可設(shè)置多個(gè)溫室分區(qū)進(jìn)行分別環(huán)境調(diào)控

§ 可結(jié)合PlantScreen高通量植物表型成像分析系統(tǒng)進(jìn)行表型組學(xué)、遺傳育種等科學(xué)研究

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圖9. 德國(guó)萊布尼茨植物遺傳與栽培作物研究所(IPK)的超大型生長(zhǎng)室結(jié)合兩套PlantScreen高通量植物表型成像系統(tǒng)

4. AlgaeTron藻類生長(zhǎng)室

§ clip_image023.jpg內(nèi)部容積:124 L、265L

§ 全LED光源,標(biāo)配冷白+遠(yuǎn)紅LED,其他光源可定制

§ 集成專用定軌搖床

§ 光強(qiáng)可達(dá)1500µmol(photons)/m2.s

§ 光照、溫度、濕度可分別同步自動(dòng)調(diào)控

§ 配備GMS150高精度氣體混合系統(tǒng),精確調(diào)控氣體組分,可進(jìn)行溫室效應(yīng)等研究

§ 配備專用軟件,用戶自定義編程控制并實(shí)時(shí)記錄環(huán)境數(shù)據(jù),可實(shí)現(xiàn)無(wú)人值守長(zhǎng)期培養(yǎng)

5. 其他培養(yǎng)方案

clip_image024.pngC*tion Bank LED 培養(yǎng)臺(tái)

§ 適用于在大型生長(zhǎng)室內(nèi)同時(shí)模擬多種光照、溫度環(huán)境,進(jìn)行植物培養(yǎng)對(duì)照實(shí)驗(yàn);也可作為生長(zhǎng)箱單獨(dú)使用

§ 全LED光源,白光+遠(yuǎn)紅光,白光+遠(yuǎn)紅光+紅光,紅光+綠光+藍(lán)光+遠(yuǎn)紅光三選一,其他光源可定制

§ 配備葉綠素?zé)晒獗O(jiān)測(cè)模塊,可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)植物光合生理和生長(zhǎng)狀況

clip_image025.jpg智能LED培養(yǎng)架

§ 用戶定制開(kāi)放式培養(yǎng)系統(tǒng)

§ 全LED光源,標(biāo)配冷白+遠(yuǎn)紅LED,其他光源可定制

§ 配備葉綠素?zé)晒獗O(jiān)測(cè)模塊,可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)植物光合生理和生長(zhǎng)狀況

§ 配備專用軟件,用戶自定義編程控制并實(shí)時(shí)記錄環(huán)境數(shù)據(jù),可實(shí)現(xiàn)無(wú)人值守長(zhǎng)期培養(yǎng)

三、發(fā)表文獻(xiàn)及應(yīng)用案例

1.擬南芥葉片和植株年齡對(duì)光合能力的影響B(tài)ielczynski L W, et. al, 2017,Leaf and plant age affects photosynthetic performance and photoprotective capacity. Plant Physiology, DOI: https://doi.org/10.1104/pp.17.00904

Bielczynski為了研究擬南芥葉片和植株年齡對(duì)光合能力的影響,使用FytoScope生長(zhǎng)箱模擬了長(zhǎng)期高光適應(yīng)培養(yǎng)過(guò)程,光強(qiáng)1800µmol(photons)/m2.s。同時(shí)使用FluorCam葉綠素?zé)晒獬上裣到y(tǒng)進(jìn)行不同生長(zhǎng)階段擬南芥植物與葉片的葉綠素?zé)晒獬上駵y(cè)量(圖10),從而發(fā)現(xiàn)在擬南芥生長(zhǎng)過(guò)程中,穩(wěn)態(tài)的光合能力在逐漸上升。在高光脅迫下,老葉的適應(yīng)能力要低于幼葉。

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圖10. 不同葉片與同一葉片不同年齡的葉綠素?zé)晒獬上?/span>

2. 擬南芥基因型和表型監(jiān)測(cè)Pavicic M, et. al, 2017,Genomic and Phenomic Screens for Flower Related RING Type UbiquitinE3 Ligases in Arabidopsis.Frontiers in Plant Science, doi: 10.3389/fpls.2017.00416

花期調(diào)控是結(jié)合內(nèi)生信號(hào)和環(huán)境信號(hào)來(lái)促進(jìn)花的發(fā)育。因此在研究相關(guān)基因表達(dá)過(guò)程中,需要對(duì)環(huán)境條件進(jìn)行嚴(yán)格控制,在結(jié)合Phenotyping表型成像進(jìn)行相關(guān)分析。芬蘭赫爾辛基大學(xué)的Pavicic在研究擬南芥泛素E3鏈接酶時(shí)就是通過(guò)FytoScope生長(zhǎng)箱調(diào)控嚴(yán)格的晝夜節(jié)律培養(yǎng)過(guò)程,同時(shí)結(jié)合PlantScreen高通量表型成像分析系統(tǒng)(圖11,圖12)對(duì)擬南芥的蓮座發(fā)育表型進(jìn)行分析。為這一研究,他們通過(guò)這兩套系統(tǒng)開(kāi)發(fā)出專門的實(shí)驗(yàn)流程,可以在一個(gè)實(shí)驗(yàn)周期里,對(duì)近1000株擬南芥進(jìn)行發(fā)育、形態(tài)和開(kāi)花的高通量表型監(jiān)測(cè)。

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圖11. 芬蘭赫爾辛基大學(xué)PlantScreen植物表型成像分析系統(tǒng)自動(dòng)傳送版 + FytoScope Walk-in大型生長(zhǎng)室

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圖12. 擬南芥蓮座形態(tài)參數(shù)與生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)

3. ABA誘導(dǎo)擬南芥氣孔關(guān)閉的調(diào)控通道Eisenach C, et. al, 2017,ABA-Induced Stomatal Closure Involves ALMT4, a PhosphorylationDependent Vacuolar Anion Channel of Arabidopsis. Plant Cell, doi:10.1105/tpc.17.00452

氣孔的開(kāi)閉與光照、溫度、濕度等環(huán)境因素密切相關(guān),因此在其相關(guān)基因與調(diào)控的研究中,必須對(duì)這些環(huán)境因素進(jìn)行精確控制。在本研究中正是使用了FytoScope生長(zhǎng)箱精確模擬了光暗交替的培養(yǎng)周期,從而測(cè)量不同光暗條件下氣孔對(duì)ABA的反應(yīng)(圖13)。

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圖13. 光暗條件下氣孔對(duì)ABA的反應(yīng)

4. 海岸帶植物對(duì)氣候變化的響應(yīng)機(jī)制

Duarte使用FytoScope模擬晝夜變化研究了C3植物Halimioneportulacoides和C4植物海岸米草Spartinamaritima在不同溶解CO2條件下的生理變化,探討鹽沼植物對(duì)氣候變化的響應(yīng)。一方面FytoScope可以調(diào)控溫度、光照及晝夜變化;另一方面FytoScope也能夠精確控制CO2濃度(Duarte,2014)。

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