規(guī)律成簇間隔短回文重復(fù)（CRISPR）在基因編輯過程中發(fā)揮了強(qiáng)大的生命力。其中，科學(xué)家掌握了對(duì)一種蛋白-Cas9的操作技術(shù)，并先后利用該技術(shù)對(duì)多種細(xì)胞的DNA進(jìn)行了編輯。這種技術(shù)被稱為CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)，迅速成為生命科學(xué)熱門的技術(shù)。不像其他基因編輯手段，它使用起來廉價(jià)、迅速且簡(jiǎn)單，并因此席卷全球?qū)嶒?yàn)室。最近科學(xué)家發(fā)現(xiàn)CRISPR在核酸檢測(cè)方面同樣表現(xiàn)出了強(qiáng)大的生命力。本品為PsmCas13b 酶，產(chǎn)品經(jīng)過純化以確保其質(zhì)量。
基于CRISPR Cas13的核酸檢測(cè)原理：
CRISPR-Cas系統(tǒng)通過RNA引導(dǎo)的內(nèi)切酶構(gòu)成細(xì)菌的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)。該系統(tǒng)經(jīng)過重新設(shè)計(jì)，創(chuàng)建了一個(gè)示例性的基因組編輯工具，用于基于RNA的治療開發(fā)。PsmCas13b（Prevotella sp. MA2016-Cas13b）是一種CRISPR-Cas效應(yīng)器，屬于第2類VI-B亞型，已被證明能有效靶向和沉默不同的哺乳動(dòng)物ssRNA病毒。Cas13b通過短和長(zhǎng)的直接重復(fù)處理自己的CRISPR陣列，切割靶RNA，并表現(xiàn)出附帶的RNase活性(圖1)。
產(chǎn)品描述：
重組全長(zhǎng)Prevotella sp. MA2016-Cas13b（PsmCasl3b）在大腸桿菌中表達(dá)。重組蛋白儲(chǔ)存在50mM Tris pH7.5、600mM NaCl、2mM DTT、5%甘油中。
儲(chǔ)存和穩(wěn)定性：
在-80℃下儲(chǔ)存產(chǎn)品。為了達(dá)到最佳儲(chǔ)存效果，離心后將試劑分裝凍存，并在推薦的溫度下儲(chǔ)存。為了獲得最佳性能，避免重復(fù)凍融。
反應(yīng)緩沖液成分：
200 mM HEPES PH 7.0、500 mM kCI、50 mM MgCl2、I mg/mL BSA。
報(bào)告底物：
合成的RNA寡核苷酸，寡核苷酸的兩端分別標(biāo)記熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)。
檢測(cè)方案：
Cas13b的RNA反式切割活性在基于CRISPR的熒光報(bào)告分析中檢測(cè)到。RNA引導(dǎo)的RNA與Cas13b結(jié)合激活酶，誘導(dǎo)靶RNA切割以及側(cè)支RNase活性。后者會(huì)導(dǎo)致在切割時(shí)發(fā)出光信號(hào)的報(bào)告底物降解。
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