雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)是一種常用的實(shí)驗(yàn)室儀器，用于測(cè)量物質(zhì)在紫外和可見(jiàn)光范圍內(nèi)對(duì)光的吸收和透射性質(zhì)。它基于分光技術(shù)和光電檢測(cè)技術(shù)，能夠準(zhǔn)確地測(cè)量樣品溶液或氣體的吸收光譜，并提供豐富的光學(xué)參數(shù)。其原理基于比較法和比色法。
比較法：分光光度計(jì)使用的是雙光束設(shè)計(jì)。它將參考光與樣品光同時(shí)照射在檢測(cè)器上。檢測(cè)器通過(guò)光電效應(yīng)將光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，并將兩個(gè)信號(hào)進(jìn)行比較。當(dāng)樣品溶液對(duì)某個(gè)特定波長(zhǎng)的光吸收較少時(shí)，參考光和樣品光的強(qiáng)度差異很小，電信號(hào)也相近。當(dāng)樣品溶液對(duì)這個(gè)波長(zhǎng)的光吸收增加時(shí)，樣品光的強(qiáng)度減弱，從而導(dǎo)致參考光和樣品光之間的強(qiáng)度差異增大，電信號(hào)也相應(yīng)增大。
比色法：雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)也可以采用比色法測(cè)量。在該方法中，使用一個(gè)底物試劑或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，并針對(duì)特定反應(yīng)選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)。當(dāng)?shù)孜镌噭┡c樣品發(fā)生化學(xué)反應(yīng)時(shí)，會(huì)產(chǎn)生染色反應(yīng)，并在特定波長(zhǎng)下吸收光線。通過(guò)測(cè)量吸光度的變化，可以確定樣品的濃度或反應(yīng)的程度。
雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)由光源、單色器、光束分離器和探測(cè)器組成。光源產(chǎn)生寬帶光源(通常包含紫外和可見(jiàn)光)，單色器根據(jù)需要選擇特定波長(zhǎng)的光線，光束分離器將光線分成參考光和樣品光，光電二極管探測(cè)器負(fù)責(zé)測(cè)量光的強(qiáng)度。通過(guò)檢測(cè)器獲得的光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)后，通過(guò)一系列的電路處理和轉(zhuǎn)換，可以得到吸光度(Absorbance)或透光度(Transmittance)值。可以利用這些數(shù)值制作吸收光譜圖、透射光譜圖或濃度-吸光度曲線等。進(jìn)一步的數(shù)據(jù)分析包括峰值尋找、吸收峰面積計(jì)算和濃度計(jì)算等。
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