分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光語及光的收收定律,對物質(zhì)進行定性、定量分析的一種方法,當光照射浴液時,當光子的能量(hv)與被照射物質(zhì)的基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量之差(DE)相等時,就能被吸收,不同物質(zhì)的基態(tài)和激發(fā)態(tài)的能量之差不等,因此,吸收光子的能量也不同,即吸收光的波長不同,這就是物質(zhì)對光的選擇性吸收。物質(zhì)選擇性的吸收某種顏色的光,則呈現(xiàn)的是照收光的互補色。以入射光的波長(l)為橫坐標,溶液的吸光度(A)為縱坐標畫出的曲線,即吸收光譜,吸收光語中吸光度的波長,為吸收波長,用/ms表示。
分光光度法測定物質(zhì)含量的依據(jù)是Lambert-Beer定律(朗伯-比爾定律),即A=Kbc
式中,A為溶液的吸光度:c為溶液的濃度;b為液層厚度。
定量測定時,常用的定量方法有標準曲線法、標準對照法、比吸光系數(shù)比較法以及差示分光光度法。它們各有其適用的范圍。由于許多物質(zhì)在可見光區(qū)無特征吸收,而在近紫外(200~400nm)處有特征吸收,故需用紫外光為光源進行測定。