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奧林巴斯顯微鏡熒光漂白學(xué)術(shù)

在光漂白（FLIP）兩者熒光丟失和恢復(fù)的光漂白（FRAP）后的相關(guān)方法是技術(shù)通過熒光的光漂白觀察細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)的移動(dòng)。浮動(dòng)熒光染料在細(xì)胞膜上的特定區(qū)域，細(xì)胞器（內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體）膜，或這些膜浮動(dòng)熒光標(biāo)記蛋白是漂白，損失或熒光的恢復(fù)觀察，研究流動(dòng)性橫向方向上（參見圖1）。被FLIP和FRAP的技術(shù)也可以用來確認(rèn)膜的連續(xù)性。

*近的一項(xiàng)研究被進(jìn)行，其中細(xì)胞骨架蛋白標(biāo)記的熒光染料，以確認(rèn)構(gòu)成微管和中等尺寸的長絲（10納米細(xì)絲）發(fā)生蛋白如何周轉(zhuǎn)（替換）（Wikstrom等人，1992）。在本研究中提出的技術(shù)可以被用于確定是否FLIP發(fā)生在末端或在長絲的中間。

奧林巴斯顯微鏡用FLIP和FRAP實(shí)驗(yàn)*近變得更容易進(jìn)行，由于使用綠色熒光蛋白（兩性平等問題協(xié)調(diào)）的。兩性平等問題協(xié)調(diào)可以在細(xì)胞中表達(dá)為融合蛋白與靶蛋白。前兩性平等問題協(xié)調(diào)成為可能，此類蛋白的行為中所需要的細(xì)胞骨架蛋白，觀察到純化，熒光標(biāo)記和導(dǎo)入細(xì)胞通過顯微注射的方法。

光漂白的熒光損失

細(xì)胞器膜中，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基體和細(xì)胞核的細(xì)胞的連續(xù)性已被翻轉(zhuǎn)驗(yàn)證。后所感興趣的區(qū)域已被光漂白，熒光迅速被擴(kuò)散的方法回收。當(dāng)在同一地區(qū)已多次漂白，整個(gè)細(xì)胞器膜的熒光消失，表明熒光浮在細(xì)胞器膜。

熒光漂白后恢復(fù)

一種熒光染料預(yù)先綴合與靶蛋白分子或脂質(zhì)膜被漂白時(shí)的試樣中感興趣的區(qū)域和FRAP是用來觀察由擴(kuò)散的手段，通過染料周轉(zhuǎn)如何在漂白的部分的熒光恢復(fù)。