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尼康顯微鏡矯正環(huán)的校準(zhǔn)

大多數(shù)顯微鏡物鏡被設(shè)計成與蓋玻璃具有0.17毫米的標(biāo)準(zhǔn)厚度和1.515的折射率，這是令人滿意的，當(dāng)物鏡的數(shù)值孔徑為0.4或更小使用。 然而，使用高數(shù)值孔徑干物鏡（0.8或更大的數(shù)值孔徑），只有幾微米的玻璃蓋的厚度變化時導(dǎo)致劇烈圖像劣化由于像差，生長惡化而增加玻璃蓋的厚度。 為了補償這個誤差，在更高度校正的物鏡配有校正，以允許調(diào)整所述透鏡組的位置，以與在蓋玻璃厚度的波動相一致。 這種互動式的教程探討修正衣領(lǐng)如何調(diào)整，以達(dá)到*佳圖像質(zhì)量。

教程初始化與隨機選擇的試樣中出現(xiàn)顯微圖像窗口和定位在圖像窗口的右側(cè)的校正物鏡的剖切圖。 此外，在初始化時，本教程會自動選擇一個隨機蓋玻片厚度標(biāo)本被認(rèn)為在顯微鏡圖像窗口。 為了操作教程，使用校正領(lǐng)滑（注意， 可移動鏡頭組在物鏡上也翻譯這個滑塊）來調(diào)整這個值約為0.17，或標(biāo)準(zhǔn)蓋板玻璃的厚度。 下一步，使用顯微鏡聚焦滑塊，以獲得清晰的圖像標(biāo)本可能。 取決于預(yù)先選定的護罩玻璃的厚度（由教程確定），檢體圖像，可能會降低或變得更尖銳作為滑塊移動到右側(cè)或左側(cè)。 繼續(xù)使用兩個校正項圈和顯微鏡焦點滑塊以提高檢體的圖像。 在本教程護罩玻璃校正覆蓋厚度變化范圍從0.10至0.25毫米。

標(biāo)準(zhǔn)厚度為蓋玻片為0.17毫米（170微米），其被為數(shù)字1.5護罩玻璃。 不幸的是，并非所有的1.5蓋板玻璃的制造，這種密切的寬容和許多標(biāo)本具有廣泛變化的他們和玻璃蓋之間的折射率的介質(zhì)。 補償玻璃蓋厚度可以通過調(diào)節(jié)顯微鏡的機械管的長度或通過專門的校正環(huán)能夠改變物鏡筒內(nèi)臨界透鏡元件之間的間隔的利用來實現(xiàn)。 校正套環(huán)調(diào)整，以補償這些細(xì)微的差別，并確保*佳的物鏡性能。 與矯正項圈正確應(yīng)用的物鏡要求在顯微鏡的經(jīng)歷，并提醒足以重新使用適當(dāng)?shù)膱D像標(biāo)準(zhǔn)的衣領(lǐng)。 在大多數(shù)情況下，焦點可能轉(zhuǎn)向和圖像可能調(diào)整校正領(lǐng)的過程中徜徉。 使用下列步驟進行小的增量調(diào)整，物鏡的修正領(lǐng)，同時觀察變化的樣本圖像。

• 定位校正，這樣在物鏡桶指示標(biāo)記刻在衣領(lǐng)住房0.17毫米刻度線重合。

• 將在載物臺上的標(biāo)本，并聚焦顯微鏡上的一個小樣本的特征。

• 旋轉(zhuǎn)校正衣領(lǐng)非常輕微和重新聚焦的目的，以確定是否所述圖像具有改善或退化。由于這樣的事實，大部分試樣的準(zhǔn)備從玻璃蓋遭受/媒體三明治太厚，通過嘗試更大的補償值（0.18-0.23）首先啟動旋轉(zhuǎn)實驗。

• 重復(fù)前面的步驟，以確定該圖像被改善或降低作為校正套環(huán)被接通在一個單一的方向。

• 如果圖像已退化，按照相同的步驟并旋轉(zhuǎn)校正衣領(lǐng)向相反的方向（朝向下的值）來查找位置提供*佳的分辨率和對比度。

當(dāng)工程師設(shè)計高數(shù)值孔徑干物鏡，它們包括的光學(xué)性質(zhì)和定位在所述前透鏡和玻璃蓋在計算之間以滿足光學(xué)校正等光程和正弦條件介質(zhì)的厚度。 物鏡旨在與油用作成像介質(zhì)被視為好像該培養(yǎng)基中的前透鏡的延伸，并且相應(yīng)地校正。 與前透鏡和蓋玻璃之間的空氣用非浸漬的物鏡，在玻璃蓋的厚度和分散性能的微小變化能成為色，球形，和慧差的來源。 此問題也發(fā)生在針對沉浸在甘油或水成像標(biāo)本的物鏡。 使用具有校正一個物鏡需要大量的實踐和認(rèn)真關(guān)注。 當(dāng)套環(huán)被調(diào)整，焦點趨于移位和圖像經(jīng)常飄蕩，從而導(dǎo)致聚焦誤差和增加像差工件。