在化學合成、天然產(chǎn)物提取以及生物制藥等領(lǐng)域,化合物的分離純化是至關(guān)重要的步驟。而制備型液相色譜(Prep-HPLC)作為一種高效、靈活的分離純化技術(shù),在其中扮演著的角色。為了實現(xiàn)對目標化合物的高效收集,高靈敏度和高選擇性的檢測器不可少。制備型蒸發(fā)光散射檢測器(Preparative Evaporative Light Scattering Detector,Prep-ELSD)正是為此而生的利器。
制備型蒸發(fā)光散射檢測器的工作原理可以概括為以下三個步驟:
霧化:色譜柱流出的流動相和樣品首先被高速氣流霧化成微小的液滴。
蒸發(fā):液滴在加熱的漂移管中流動,揮發(fā)性溶劑被蒸發(fā),留下不揮發(fā)的待測物顆粒。
檢測:激光光束照射顆粒,產(chǎn)生光散射信號,由光電倍增管檢測并轉(zhuǎn)化為電信號,最終形成色譜圖。
二、制備型蒸發(fā)光散射檢測器的優(yōu)勢
與傳統(tǒng)的紫外-可見光檢測器(UV-Vis)相比,制備型蒸發(fā)光散射檢測器具有以下優(yōu)勢:
通用性強:ELSD不依賴于待測物的光學性質(zhì),只要化合物在檢測條件下不易揮發(fā),即可被檢測,適用于沒有紫外吸收或紫外吸收較弱的化合物,如糖類、脂類、聚合物等。
靈敏度高:ELSD的靈敏度通常高于示差折光檢測器(RID),能夠檢測到更低濃度的樣品。
兼容性強:ELSD可以使用揮發(fā)性流動相,例如含有緩沖鹽的流動相,與質(zhì)譜檢測器(MS)具有良好的兼容性,方便進行后續(xù)的結(jié)構(gòu)鑒定。
穩(wěn)定性好:ELSD的檢測信號不受流動相梯度變化的影響,基線穩(wěn)定,有利于提高檢測的準確性和重復性。
三、制備型蒸發(fā)光散射檢測器的應用
制備型蒸發(fā)光散射檢測器廣泛應用于各種需要分離純化化合物的領(lǐng)域,包括:
天然產(chǎn)物分離:從植物、動物、微生物等天然來源中分離純化活性成分,如生物堿、黃酮、萜類等。
藥物研發(fā):分離純化藥物中間體、原料藥以及雜質(zhì),用于結(jié)構(gòu)鑒定、活性篩選和藥理研究。
食品分析:分離純化食品中的添加劑、營養(yǎng)成分以及有害物質(zhì),用于食品安全檢測和質(zhì)量控制。
聚合物分析:分離純化不同分子量的聚合物,用于研究聚合物的結(jié)構(gòu)和性能。
四、制備型蒸發(fā)光散射檢測器的選擇和使用
選擇合適的制備型蒸發(fā)光散射檢測器需要考慮以下因素:
靈敏度:根據(jù)待測物的濃度范圍選擇合適的靈敏度。
線性范圍:確保檢測器的線性范圍能夠覆蓋待測物的濃度范圍。
霧化氣體:常用的霧化氣體包括氮氣、空氣等,需要根據(jù)實際情況選擇。
漂移管溫度:漂移管溫度需要根據(jù)流動相的沸點和待測物的熱穩(wěn)定性進行優(yōu)化。
在使用制備型蒸發(fā)光散射檢測器時,需要注意以下事項:
流動相的選擇:盡量使用揮發(fā)性流動相,避免使用不揮發(fā)的緩沖鹽和添加劑。
流速的控制:流速需要與色譜柱的尺寸和填料的粒徑相匹配,以獲得最佳的分離效果。
漂移管溫度的設(shè)置:漂移管溫度需要根據(jù)流動相的沸點和待測物的熱穩(wěn)定性進行優(yōu)化,以確保溶劑完全蒸發(fā)且待測物不被分解。