在化學(xué)合成、天然產(chǎn)物提取以及生物制藥等領(lǐng)域,化合物的分離純化是至關(guān)重要的步驟。而制備型液相色譜(Prep-HPLC)作為一種高效、靈活的分離純化技術(shù),在其中扮演著的角色。為了實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)化合物的高效收集,高靈敏度和高選擇性的檢測(cè)器不可少。制備型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(Preparative Evaporative Light Scattering Detector,Prep-ELSD)正是為此而生的利器。
制備型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的工作原理可以概括為以下三個(gè)步驟:
霧化:色譜柱流出的流動(dòng)相和樣品首先被高速氣流霧化成微小的液滴。
蒸發(fā):液滴在加熱的漂移管中流動(dòng),揮發(fā)性溶劑被蒸發(fā),留下不揮發(fā)的待測(cè)物顆粒。
檢測(cè):激光光束照射顆粒,產(chǎn)生光散射信號(hào),由光電倍增管檢測(cè)并轉(zhuǎn)化為電信號(hào),最終形成色譜圖。
二、制備型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的優(yōu)勢(shì)
與傳統(tǒng)的紫外-可見光檢測(cè)器(UV-Vis)相比,制備型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器具有以下優(yōu)勢(shì):
通用性強(qiáng):ELSD不依賴于待測(cè)物的光學(xué)性質(zhì),只要化合物在檢測(cè)條件下不易揮發(fā),即可被檢測(cè),適用于沒有紫外吸收或紫外吸收較弱的化合物,如糖類、脂類、聚合物等。
靈敏度高:ELSD的靈敏度通常高于示差折光檢測(cè)器(RID),能夠檢測(cè)到更低濃度的樣品。
兼容性強(qiáng):ELSD可以使用揮發(fā)性流動(dòng)相,例如含有緩沖鹽的流動(dòng)相,與質(zhì)譜檢測(cè)器(MS)具有良好的兼容性,方便進(jìn)行后續(xù)的結(jié)構(gòu)鑒定。
穩(wěn)定性好:ELSD的檢測(cè)信號(hào)不受流動(dòng)相梯度變化的影響,基線穩(wěn)定,有利于提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。
三、制備型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的應(yīng)用
制備型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器廣泛應(yīng)用于各種需要分離純化化合物的領(lǐng)域,包括:
天然產(chǎn)物分離:從植物、動(dòng)物、微生物等天然來源中分離純化活性成分,如生物堿、黃酮、萜類等。
藥物研發(fā):分離純化藥物中間體、原料藥以及雜質(zhì),用于結(jié)構(gòu)鑒定、活性篩選和藥理研究。
食品分析:分離純化食品中的添加劑、營(yíng)養(yǎng)成分以及有害物質(zhì),用于食品安全檢測(cè)和質(zhì)量控制。
聚合物分析:分離純化不同分子量的聚合物,用于研究聚合物的結(jié)構(gòu)和性能。
四、制備型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的選擇和使用
選擇合適的制備型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器需要考慮以下因素:
靈敏度:根據(jù)待測(cè)物的濃度范圍選擇合適的靈敏度。
線性范圍:確保檢測(cè)器的線性范圍能夠覆蓋待測(cè)物的濃度范圍。
霧化氣體:常用的霧化氣體包括氮?dú)狻⒖諝獾?,需要根?jù)實(shí)際情況選擇。
漂移管溫度:漂移管溫度需要根據(jù)流動(dòng)相的沸點(diǎn)和待測(cè)物的熱穩(wěn)定性進(jìn)行優(yōu)化。
在使用制備型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器時(shí),需要注意以下事項(xiàng):
流動(dòng)相的選擇:盡量使用揮發(fā)性流動(dòng)相,避免使用不揮發(fā)的緩沖鹽和添加劑。
流速的控制:流速需要與色譜柱的尺寸和填料的粒徑相匹配,以獲得最佳的分離效果。
漂移管溫度的設(shè)置:漂移管溫度需要根據(jù)流動(dòng)相的沸點(diǎn)和待測(cè)物的熱穩(wěn)定性進(jìn)行優(yōu)化,以確保溶劑完全蒸發(fā)且待測(cè)物不被分解。