二代測序技術(shù)以其短讀長、高通量、準確性高的特點,仍在測序市場上占優(yōu)勢地位。以Illumina Solexa為例,首先利用超聲波將DNA打斷成200-500bp小片段文庫,加接頭后DN段隨機附著于flowcell表面,經(jīng)過橋式PCR擴增形成“DNA簇",實現(xiàn)堿基信號強度放大,采用邊合成邊測序的方法,進行全基因組全面,準確的測序。
圖1 Hiseq Xten (左) 與 NovaSeq 6000(右)
2014年Illumina推出HiSeq X Ten測序儀,它利用數(shù)十億個納米孔的流動槽,較大縮短了測序周期。2017年它又推出了新一代測序儀NovaSeq系列,我們以相同文庫分別進行Hiseq Xten系列和NovaSeq系列測序,DNA重測序產(chǎn)出數(shù)據(jù)指標如下:
表1 DNA重測序結(jié)果比較
看完重測序,再看看轉(zhuǎn)錄組文庫測序比較:
表2轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果比較
基于以上結(jié)果,圖譜君總結(jié)了以下幾點:
1.測序原理:X-ten與Nova6000測序原理均是基于solexa的邊合成邊測序的原理;Nova6000采用Illumina的EX-AMP簇生成技術(shù),以及新一代的Patterned Flow Cell。
2.Q30質(zhì)量值:在實際測序中Nova6000的Q30相對于X-ten更穩(wěn)定且測序時長更短,試劑衰減對質(zhì)量影響更小,整體的Q30 Nova6000要優(yōu)于X-ten。
3.測序方式:受限于X-ten的控制軟件以及試劑等因素,X-ten只能進行單Index的測序識別;而Nova6000可以進行I7 I5雙端Index的測序,理論上可以做到更的識別。
4.DNA文庫冗余度:Nova6000明確優(yōu)于X-ten平臺。
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